用agilent2100芯片生物分析系统测定鱼类的pcr-rflp图谱应用.pdfVIP

用 Agilent 2100 芯片生物分析系统测定鱼类 的 PCR-RFLP 图谱 应用 食品安全 作者 性和种系。因此，需要一种可靠而简便的种类鉴定方 法，以支持标签法的强制性规范（欧盟理事会规则 Steve Garrett and John Dooley 第 104/2000 和 EC 委员会规则第 2065/2001 ）。 Molecular Biology Group, Dept. of Chemistry and Biochemistry Campden Chorleywoood Food Research Association, Chipping 形态学鉴定法是适合整条鱼的种系鉴定方法，但是， Campden 一旦进行了加工，鱼种鉴定将变得很困难。蛋白图谱 Gloucestershire, GL55 6LD UK 也可以用来进行鱼类鉴定，但这种方法需要和样品一 起分析种类参考物质，由于加工过的食品中蛋白质已 摘要 经变性，分析时可靠性较低。基于 DNA 的方法为鱼 类鉴定提供了另一种途径，因为即使对于深度加工的 样品，其 DNA 还是可以检测的。 本应用报告介绍了安捷伦 2100 芯片生物分析系统在聚合酶链 反应-限制性片段长度多态性分析鉴定鱼类中的应用。先对所 直接测序是最权威的鉴定方法，但是对于怀疑或已知 有脊椎鱼类中存在的 464bp 细胞色素 b 目标序列进行扩增， 其含有一个以上种类的样品，这种方法操作起来并不 然后用限制酶水解。在 DNA 500 LabChip® 上对这些片段进 容易。因此，发展了其他的技术，用聚合酶链反应 行分离，由于准确测定了片段大小，所以能与权威性的种类图 （PCR ），以 DNA 指纹图谱为基础对鱼类进行鉴定。 谱进行直接比较。与经典的凝胶电泳和 DNA 染色技术进行 这 些 方 法 包 括 RAPD （ 随 机 扩 增 多 态 性DNA ）、 PCR-RFLP 片段分析相比，使用芯片生物分析系统具有明显的 SSCP （单链构象多态性）和PCR-RFLP 。 优势。 曾有报导 PCR-RFLP 技术用于鲑鱼的鉴定 [1, 2] ，包 前言 括用限制酶对扩增的细胞色素 b 464bp 进行裂解，产 生 DNA 图谱。 近年来提供给消费者的鱼产品差别越来越大。从优质 的鱼肉到廉价的鱼尾。鱼产品要经过捕获、加工到分 销至全球各地的过程，需要确定产品所用鱼类的真实 本研究的目的是用安捷伦 2100 芯片生物分析系统代 说明进行纯化。 DNA 提取物复溶于 50 µL 1TE 缓冲 替经典的凝胶电泳和染色步骤，对鲑鱼和其它鱼类的 液 中（10 mM Tris-HCl，pH 7.4 ，1-mM EDTA，pH 鉴定方法进行改进。在 2100 芯片生物分析系统上得 8.0 ）。DNA 的最终浓度（ ng/µ L ）用 GeneQuant 到的种类特异性 PCR-RFLP 图谱，以及对各