稻瘟菌CYP51蛋白F螺旋区保守氨基酸残基与烯唑醇作用机制研究.PDF

微生物学通报 Dec. 20, 2015, 42(12): 2433−2439 Microbiology China © 2015 by Institute of Microbiology, CAS tongbao@ DOI: 10.13344/j.microbiol.china.150205 简 报 稻瘟菌CYP51 蛋白F 螺旋区保守氨基酸残基与 烯唑醇作用机制研究 1,2 1 1 1 1 1 1* 廖卫芳 刘婷婷 杨劭 张国森 舒潼 王乐乐 杨娇艳 (1. 华中师范大学 生命科学学院 湖北 武汉 430079) (2. 华中科技大学 生命科学与技术学院 湖北 武汉 430074) 摘 要：【目的】研究稻瘟菌CYP51 蛋白F 螺旋区保守氨基酸残基与烯唑醇的相互作用机制，为 稻瘟病菌新型高效特异杀菌剂的开发提供理论依据。【方法】设计稻瘟菌CYP51 蛋白F 螺旋区保 守氨基酸残基突变体P222C 、P222H 、I223A、I223W、N224A 、N224S ，截去N 端跨膜区36 个氨 基酸后，在大肠杆菌BL21(DE3) Rosetta 菌株中过量表达，采用结合光谱法分析诱导蛋白对烯唑醇 的结合能力。【结果】表达的目标蛋白均保持了对药物的结合能力，呈现出II 型的结合光谱曲线。 相对于野生型蛋白，突变体I223W 和I223A 对烯唑醇的结合常数Kd 值基本不变，N224S 、N224A 、 P222C 的Kd 值都略有增大，无显著性差异(P0.05) ，但是，P222H 的Kd 值有了显著的增大(P0.05) ， 表明突变体P222H 对烯唑醇的亲和能力显著降低。【结论】稻瘟菌CYP51 P222 位点的疏水性与 药物结合密切相关。 关键词：稻瘟菌，烯唑醇，CYP51 ，突变，结合光谱 Interaction between the conserved amino acid in Magnaporthe oryzae CYP51 F helix and Diniconazole LIAO Wei-Fang1,2 LIU Ting-Ting1 YANG Shao1 ZHANG Guo-Sen1 SHU Tong1 1 1* WANG Le-Le YANG Jiao-Yan (1. College of Life Sciences, Central China Normal University, Wuhan, Hubei 430079, China) (2. College of Life Science and Technology, Huazhong University of Science and Technology, Wuhan, Hubei 430074, China) Abstract: [Objective] The interaction between the conserved amino acid in Magnaporthe oryzae CYP51 F helix and Diniconazole was studied, aiming to help for designation