HPSH_05790真核表达质粒的构建和其生物学效应的初步观察.pdf

rlflTlITI III I FTP IFIIFIF IJf ＼1 目 录 一、摘要 中文论著摘要…………………………………………………………………1 英文论著摘要…………………………………………………………………5 二、英文缩略语……………………………………………………………………8 三、论文 前言……………………………………………………………………………9日U舌…………………………………………………………………………… 材料与方法……………………………………………………………………10 实验结果………………………………………………………………………15 讨论……………………………………………………………·……………··18 结论……………………………………………………………………………20 四、本研究创新性的自我评价……………………………………………………2l 五、参考文献………………………………………………………………………22 六、附录 综述……………………………………………………………………………24 在学期间科研成绩……………………………………………………………36 致谢……………………………………………………………………………37 个人简介………………………………………………………………………38 ·中文论著摘要· HPSH一05790真核表达质粒的构建 及其生物学效应的初步观察 目的 幽门螺杆菌(Helicobacterpylori，Hpylori)是慢性胃炎和消化性溃疡的重要病 原菌，且与胃癌的发生密切相关。现已有许多研究致力于探讨Hpylori致病相关 的细菌、宿主和环境因素之间的交互作用。其中，鉴定病原菌的毒力株和毒力蛋 白是微生物致病机理研究的基本策略。Enroth等采用2-DE和免疫印迹技术对来自 胃炎、十二指肠溃疡和胃癌患者的不同Hpylori临床分离株进行蛋白质组学研究， 结果提示不同类型胃疾病的Hpylori菌株蛋白质组中存在疾病特异性蛋白。 目前研究发现，与H．pylori菌株致病性有关的基因位点主要为细胞毒素相关 有学者陆续报道一些功能未知或尚未鉴定的菌株特异性基因位点也可能与 H．pylori相关性胃疾病的发生发展密切相关。 前期，我室通过抑制消减杂交(SSH)和斑点杂交的方法建立胃癌相关幽门 螺杆菌差异基因文库，对差异基因进行筛选挑出11个与胃癌相关的高拷贝基因序 列，证实了其中HPSH05790在胃癌患者来源的菌株L301及浅表性胃炎患者来源 的菌株B975的基因中存在拷贝差异。 ofGenes 目前，该差异基因的具体功能尚不清楚。KEGG(KyotoEncyclopedia and cis．transisomerase Genomes)数据库报道其蛋白结构域中包含peptidyl．prolyl 功能域，即肽基．脯氨酰．顺反异构酶(PPIase)，其被证实在嗜肺军团菌中具有毒 力因子特征。 本研究通过构建胃癌相关差异基因幽门螺杆菌HPSH05790真核表达质粒， 细胞周期的变化。为进一步探索疾病相关Hpylori菌株的致病机制，寻找具有针 对性的治疗靶点提供实验工具和研究线索。 材料和方法 一、细胞系、菌株和质粒 来自北京市肿瘤防治研究所细胞遗传室。人胃腺癌细胞系SGC．7901和H．pylori 菌株及DNA来自中国医科大学肿瘤研究所肿瘤病因与筛查研究室。DH5a感受态 学院生理／药理学系刘军副教授赠与。 二、实验方法 (一)HPSH 05790基因真核表达质粒的构建及其表达