L-NAME联合ZnPP-9对大鼠肝硬化门静脉压力的影响和其相关酶学研究.pdf

摘 要 目的： 应用NO 抑制剂L-NAME 及CO 抑制剂ZnPP-9 抑制内源性NO 、CO 的生成，观察肝硬化大鼠 门静脉压力以及硫化氢（H S ）/胱硫醚-?-裂解酶 （CSE）体系的变化，从而探讨 NO/ NOS 体系及 2 CO/ HO- 1 体系在大鼠肝硬化门静脉高压中的作用及对H S/ CSE 体系的影响。 2 材料和方法： 复合因素法制备肝硬化大鼠模型，造模结束后，将 SD 大鼠随机分为4 组：正常对照组（NC 组）、 正常对照+左旋硝基精氨酸甲酯（L-NAME ）+锌原卟啉-9 （Znpp-9 ）组（NC+L-NAME+ ZnPP-9 组）、 肝硬化模型组（CIRM 组）、肝硬化模型+左旋硝基精氨酸甲酯（L-NAME ）+锌原卟啉-9 （Znpp-9 ） 组（CIRM+L-NAME+ ZnPP-9 组）。利用插管法测定大鼠门静脉压力；硝酸还原酶法测定大鼠血浆中 NO 的含量；联二亚硫酸盐法测定CO 的含量；运用敏感硫电极方法检测大鼠血浆中H S 的含量； 2 应用免疫组织化学方法对大鼠门静脉内皮细胞上 eNOS、iNOS、HO- 1 以及CSE 蛋白进行定位及半 定量分析；利用蛋白质免疫印迹技术（Western blot ）测定大鼠肝组织中eNOS、iNOS、HO- 1 以及 CSE 蛋白的表达量。 结果: 1 肝硬化大鼠模型的建立 肝硬化大鼠肝脏组织经病理学证实，大体上可见肝硬化大鼠肝脏变形，失去正常光泽，表面凹 凸不平呈结节状，质地硬，光镜下见肝细胞再生，脂肪变性、纤维结缔组织增生及假小叶形成 2 门静脉压力测定 与NC 组相比，CIRM 组压力明显升高（P ＜0.01 ），而NC+L-NAME+ ZnPP-9 组压力则无统计 学意义；与CIRM 组相比，CIRM+L-NAME+ ZnPP-9 组压力明显降低，有统计学意义（P ＜0.01 ）。 3 血浆中NO、CO 及H S 含量变化 2 与NC 组相比，CIRM 组血浆中NO 、CO 含量明显升高，H S 的含量则明显降低（P ＜0.01 ）， 2 NC+L-NAME+ ZnPP-9 组NO 、CO 含量明显降低，H S 的含量则明显升高，有统计学意义（P ＜0.01 ）； 2 与CIRM 组相比，CIRM+L-NAME+ ZnPP-9 组NO 、CO 含量明显降低，H S 的含量则明显升高（P 2 ＜0.01 ）。 4 门静脉内皮细胞上eNOS 、iNOS 、HO-1 以及CSE 蛋白免疫组化观察 与NC 组相比，CIRM 组eNOS、iNOS、HO- 1 蛋白含量明显升高，CSE 蛋白的含量则明显降低 （P ＜0.01 ），NC+L-NAME+ ZnPP-9 组eNOS、iNOS、HO- 1 蛋白含量明显降低，CSE 蛋白的含量则 明显升高，有统计学意义（P ＜0.01 ）；与CIRM 组相比，CIRM+L-NAME+ ZnPP-9 组eNOS、iNOS、 HO- 1 含量明显降低，CSE 蛋白的含量则明显升高（P ＜0.01 ）。 5 肝组织中eNOS、iNOS、HO- 1 以及CSE 蛋白的表达 与NC 组相比，CIRM 组iNOS、HO- 1 蛋白含量明显升高，eNOS、CSE 蛋白的含量则明显降低， 而（P ＜0.01 ），NC+L-NAME+ ZnPP-9 组eNOS、iNOS、HO- 1 蛋白含量明显降低，CSE 蛋白的含量 I 则明显升高，有统计学意义（P ＜0.01