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MAPK信号通路在高糖导致人腹膜问皮细胞PARP—l激活、细胞外基质聚集及转分化的作用 ◎ 颈：t论文 MAPK信号通路在高糖导致人腹膜间皮细胞PARP．1 激活、细胞外基质聚集及转分化的作用 专 业： 内科学 硕士研究生： 黄文 导 师： 姜宗培教授 中文摘要 随着终末期肾病患病人数的增加，肾脏替代治疗成为肾专科医务人员的关注 焦点之一。腹膜透析作为肾脏替代治疗的一种，具有以下优点：不需要血管通路、 不影响日常工作和学习、能较好的清除中分子物质、能延缓残余肾功能下降的速 度等。然而，长期使用含葡萄糖的透析液会导致腹膜纤维化，最终放弃腹膜透析。 作为长期腹膜透析患者的常见并发症，腹膜纤维化不仅损害腹膜结构，也可导致 许多并发症，是当前研究热点之一。然而，目前腹膜纤维化的发生的具体机制仍 不清楚，而且防治的措施也较为限，因此，探讨其发病机制及其相关因素，具有 重要的意义。 正常情况下，腹膜是一连续的半透膜，由三层结构构成：一层由扁平状问皮 cell 细胞呈连续排列所构成的一道单层结构：另一层为问皮细胞(mesothelial MCs)下结缔组织；两者之间又有一层基底膜将两层分隔。腹膜纤维化发生时， 首先受累的是腹膜间皮细胞，表现为细胞间隙扩大，微绒毛减少或消失，细胞膜 葡萄糖载体增多；成纤维细胞数量增加出现间皮细胞层下纤维化。其次是血管的 变化，表现为毛细血管数量增多，且血管基膜增厚。长期腹膜透析的患者，间皮 细胞的微绒毛减少、消失，从基底膜脱落至完全消失，最后只剩下裸露的纤维结 缔组织。 研究发现，高糖腹膜透析液可导致腹膜间皮细胞肥大。近期研究还发现问皮 细胞的肥大是细胞早期衰老的表现，这可能与腹膜的损伤有关。最终使腹膜对感 染和纤维化的防御功能受损，导致纤维化和功能进行性丧失。 MAPK信号通路在高糖导致人腹膜间皮细胞PAP,P-1激活、细胞外基质聚集及转分化的作用 ◎ 硕士论文 研究显示：高糖引起活性氧化产物(reactiveoxygen species，ROS)可能在腹 膜纤维化中起重要的作用。我们既往的研究表明，在人腹膜间皮细胞(human mesothelial peritoneal 间皮细胞PARP．1表达增加；下调PARP．1的表达能部分逆转高糖诱导的腹膜问 皮细胞转分化及细胞外基质积聚。而丝裂素原活化蛋白激酶通路可被活性氧化产 可以通过细胞DNA损伤或非DNA损伤而介导，并呈细胞损伤程度和时间依赖 性。在细胞损伤早期，通过细胞信号传导，PARP．1表达上调；后期，大量ROS 损伤DNA，活化PARP．1，进而调节细胞修复损伤、炎症反应、细胞凋亡等。活 化PARP．1的依赖DNA损伤与非依赖DNA两种平行方式时有重叠，这对在细胞 生理、病理状态下PARP．1的功能调节有重要意义。有研究认为，在细胞受损早 期，细胞外信号可通过MAPK信号通路激活PARP．1，参与免疫应答、炎症反应； 大量ROS可通过MAPK通路介导PARP．1活化，参与细胞凋亡等。 目前，在高糖刺激下，MAPK信号通路是否参与HPMCs的PARP．I的激活， 目前尚不清楚。本研究就以上问题试图初步探讨MAPK信号通路和PARP．1的 关系及其激活在腹膜间皮细胞转分化及腹膜纤维化当中的作用。这将为腹膜纤维 化的防治开拓新的视野和途径，同时为新药的开发和研制奠定基础。 第一章 高糖对HPMCs的MAPK通路及PARP-1的影响 一、目的 探讨人腹膜问皮细胞株HMrSV5在高糖刺激下，三条主要MAPK信号通路 的活化情况及PARP．1的蛋白表达情况。 二、材料和方法 葡萄糖)刺激0’、5’、30’、lh、2h、8h、24h，并选择等渗的甘露醇作为对照用。 Western 用Westemblot检测在不同时间