miR-21对胰腺癌细胞增殖、凋亡及化疗敏感性的影响及其作用机制.pdfVIP

目录 缩略词表………………………………………………………………………………………．2 中文摘要………………………………………………………………………………………．．3 Abstract……………………………………………………………………………………………………………………．．4 前 言…………………………………………………………………………………………一6 第一部分：胰腺癌细胞的培养和转染效率的检测…………………………………………．12 材料与方法………………………………………………………………………………．．13 实验结果…………………………………………………………………………………．．20 {寸论……………………………………………………………………………………………………………………．．24 第二部分：m．R-21对胰腺癌细胞增殖、凋亡和化疗敏感性的影响………………………一27 材料与方法………………………………………………………………………………。28 实验结果…………………………………………………………………………………一32 讨论……………………………………………………………………………………………………………………．．39 第三部分：miR一21在胰腺癌细胞中的作用机制研究………………………………………45 材料与方法………………………………………………………………………………．．46 实验结果…………………………………………………………………………………一61 讨论……………………………………………………………………………………………………………………一67 小结………………………………………………………………………………………………………………………一74 综述………………………………………………………………………………………………………………………．．75 致谢………………………………………………………………………………………………………………………。85 1 缩略词表 2 中文摘要 目的：研究miR一2l对胰腺癌细胞生物行为学的影响，并对其作用机制进行初步探 讨。 方法：分别以miR一21类似物和miR一21抑制物转染胰腺癌MIAPaca一2细胞，以转 染无义序列组为对照，采用ccK一8法检测细胞增殖，流式细胞术和Caspase3活性 检测分析细胞凋亡，WesternB10t法检测相关蛋白的表达，双荧光素酶报告基因的 方法探索miR一21的潜在靶基因。 结果：各种质粒在胰腺癌细胞系MIAPaCa一2中的转染效率约为70％左右。与转染无 义序列的对照组相比，转染miR一21类似物的细胞miR一21表达明显上调，细胞增殖 能力增强，凋亡比例减少，对化疗药物吉西他滨的敏感性降低。在分子层面，转染 miR一2l类似物组的Caspase3活性降低，bc卜2蛋白表达量增高，bax表达量降低， 转染含有野生型Bc卜2 3’UTR区的pRL—TK质粒后，细胞海肾荧光素酶产生的荧光 强度增高，而转染含突变型Bcl一2 3’UTR区的pRL—TK质粒后，细胞无明显改变。 物后，细胞增殖能力降低，凋亡比例增高，对化疗药物吉西他滨的敏感性提高。在 分子层面，转染miR一21抑制物之后，Caspase3活性升高，bc卜2蛋白表达量降低， bax表达量提高，转染含有野生型Bc卜2 3’UTR区的pRL—TK质粒后，细胞海肾荧 光素酶产生的荧光强度降低，而转染含突变型Bcl一2 3’UTR区的pRL—TK质粒后， 细胞无明显改变。 结论：miR一21通过对bc卜2家族蛋白表达的调控，促进胰腺癌细胞的增殖、抑制凋 亡，并降低化疗敏感性。这种作用可能是由miR一2l对bc卜23’UTR区的直接作用 造成的。 关键词：胰腺癌，miR一2