乳酸乳球菌发酵乳链菌肽的的分析研究.pdfVIP

摘要 摘要 随着人们生活水平的提高，人们对高效安全的天然生物食品防腐剂的需求量越来越 大。Nisin作为少有的几种高效安全天然生物防腐剂之一近年来倍受青睐，但其较高价 格限制了它的广泛使用。由于国外技术的垄断，我国的Nisin发酵水平还有待提高。 本文从Nisin效价的测定方法，生产菌种的诱变育种，发酵工艺(包括摇瓶和上罐 两个部分)，三个大的方面进行了研究。 通过对Nisin效价测定方法的研究，建立了琼脂扩散法测定Nisin效价的具体方法， IU／mL范围内，效价的对数与抑菌圈的直径之间有线性关系；在采用抗生素测定专用的 9cm平板，平板中培养基加量为20mL，7 nHn打孔器打孔的条件下，最佳的指示菌OD5∞ 1．088X．0．1724。 ℃。得到的具体效价计算方程为y=l 通过对生产菌种的诱变育种获得了高产菌株。经过微波诱变获得一株高于原始菌株 产量33．5％的突变菌株LL4。经过紫外诱变获得一株高于原始菌株产量26．1％的突变菌 株LLl4。经过微波与紫外的联合诱变获得一株高于原始菌株产量72．2％的突变菌株 LL22。 通过摇瓶发酵工艺研究发现：1、Nisin的产生与细胞快速生长同步进行，显示了初 级代谢动力学特征。2、振荡培养优于静止培养，葡萄糖在单独灭菌的条件下也是很好 的碳源。3、得到摇瓶发酵最佳条件为：蔗糖3．O％，鱼粉蛋白胨1．0％，酵母粉1．5％， ⅪH2P04。12H202．0％，NaCl 0．02％，吐温-80 0．2％，MgS04·7H20 0．7％(V／V)，初始pH 7．5，种龄12 mL／250mL，摇床转 h，接种量4％ⅣⅣ)，培养温度27℃，装液量为50 速90r／min，在此条件下发酵液效价达到5126IU／mL。4、缓冲策略的应用可以很大幅 大幅度提高菌体生长量和发酵液中Nisin的效价，确定其最佳添加量为1％，在此条件 下发酵液的效价能达到7000IU／mL以上。很多缓冲溶液都能或多或少的提高发酵液的 IU／mL，比用自来水配制的CM培养基效价提高了近3000II7，mI，。 通过上罐发酵工艺研究发现：l、上罐条件下，通气比不通气更有利于提高茵体的 生长量，更有利于提高发酵液的效价。7L罐，装液量4L的条件下最佳通气量为O．5 VⅣ·m。2、在一定的范围内恒定pH发酵有利茵体生长，有利于大幅度提高发酵液的效 价达到8000 IU／mL左右。3、用蔗糖和葡萄糖两种碳源共同发酵的条件下，葡萄糖得到 优先利用，但总体效价并没有大的提高。 关键词：效价，琼脂扩散法，乳酸乳球菌，乳酸链球菌素，诱变 Abstract with standard amountof andsafe living raising,morehighperformance Alongpeople’s asone andsafenaturalfood Ilaturalfood isneeded．Nisinof preservative highperformance isusedmoreand itisn’t usedbecausethe more，but hi．gh preservative extensively price．