PI-3K、DGATlt;,2gt;、PKC-ε在大鼠非酒精性脂肪性肝病发病机制的作用探究.pdfVIP

㈨㈣洲1111l删l 7848 Y1 PI．3K、DGAT2、PKC．￡在大鼠非酒精性脂肪性肝病 发病机制的作用研究 摘 要 liver 目的：非酒精性脂肪性肝病(non．alcoh01ic觚y 是指除外酒精和其他明确的肝损伤因素所致的，以弥漫性肝细胞大泡性脂 肪变为主要特征的临床病理综合征，包括单纯性脂肪性肝病以及由其演变 的脂肪性肝炎和肝硬化【m】；目前，NAFLD的具体发病机制并不是十分清 楚，是一种代谢应激性肝损伤，其与胰岛素抵抗和遗传易感性密切相关【3-51。 本实验旨在通过改良高脂饮食建立非酒精性脂肪性肝病大鼠模型，通过时 l【inase Acyltransferase一2，DGAT2)、蛋白激酶CQroteinC，PKC)的亚型PI∞_￡ 在脂肪肝的表达量的变化，从而进一步探索NAFLD的发病机制。方法： 机分为2组，设立4、8、12周高脂喂养模型组(H组)，并设立同时相正常 喂养组(N组)作为对照，每组8只。正常饮食组给予基础饲料(泸州医院实验 动物中心提供)，模型组给予高脂饮食(即制备的改良高脂饲料：胆固醇含2 ％，胆酸钠含O．5％，丙硫氧嘧啶含O．2％，蔗糖含5％，猪油含10％，基 末时分别处死对照组及模型组大鼠各8只，心脏采血，测量大鼠的血清转 脂变进展；然后迅速取出肝脏称肝湿重，计算肝指数：肝湿质量／体质量 ×100％。取肝组织标本，制备石蜡切片，行苏木精．伊红(HE)染色观察肝 组织光镜下的病理改变，并观察肝脏脂肪变程度；免疫组织化学法检测 PKC．￡在肝组织中的表达情况；实时荧光定量PCR法(real．time PCR)检测肝脏PI．3K砌[蝌A以及DGAT2mRNA的表达。计量资料用均数 士标准差(万士^妨)表示，采用t检验，组间比较采用方差分析，方差齐者 采用单因素方差分析，方差不齐者采用H检验，比较模型组与对照组及模 型组间在血清学、病理学等指标的差别，尸O．05有统计学意义。结果：1． 间的逐渐延长与正常组相比明显升高。2．病理学观察：(1)肝脏大体观察： 肉眼可见大鼠正常组肝脏呈鲜红色；与之比较模型组肝脏肉眼观即可出现 肝脏颜色变黄，有油腻感，肝脏体积增大。(2)组织学观察：正常组大鼠肝 小叶结构清晰，肝窦网状纤维疏松。模型组4、8、12周动物肝组织出现中 至重度肝细胞脂肪变性，随造模时间延长脂肪变程度、气球样变以及纤维 肝细胞气球样变、小叶内炎症和纤维化发生普遍，并且脂肪变性与小叶内 炎症、纤维化及肝细胞气球样变程度间呈正相关关系。3．PKC-￡免疫组织 化学法的表达：对照组肝脏中呈散在分布，胞浆内着色，弱阳性。模型组 PKC．￡在肝脏的细胞膜及细胞浆内呈明显的棕黄色阳性表达，随着时间的 延长，棕黄色的阳性表达逐渐加深，并呈片状分布，分布的范围越广，且表 达量较正常对照组明显增加。造模4周时，肝细胞着色较正常组深，散在 分布。造模8周时，棕黄色颗粒在阳性细胞的表达加深，分布较密集，阳 性细胞增多。造模12周时，可见阳性细胞增加，棕黄色表达进一步加深， 呈弥漫、大片分布。4．荧光定量PI．3K mRNA在肝组织的 mRNA及DGAT2 表达：PI．3K枷刚A在模型组随着脂肪变、纤维化、炎症程度的加重，表 达量逐渐减少且模型组各组之间与正常组表达量相比明显减少(尸O．05)； DGAT2删[ⅢA在模型组随着肝脂肪变、纤维化、炎症程度的加重，表达量 逐渐上升且模型组各组之间与正常组表达量相比呈显著增加(氏O．05)。结 相关。2．随着模型组脂肪肝程度的加重PKC-￡、DGAT2表达量也明显增加， 关，与肝脂肪变程度呈正相关。 关键词：非酒精性脂肪性肝病； PI．3K；DGAT2