基于16srrna基因克隆文库技术分析广西富钟水牛-动物营养学报.pdfVIP

动物营养学报２０１４，２６（１２）：３６３５⁃３６４２ ＣｈｉｎｅｓｅＪｏｕｒｎａｌ ｏｆ ＡｎｉｍａｌＮｕｔｒｉｔｉｏｎ 　 ｄｏｉ：１０．３９６９／ ｊ．ｉｓｓｎ．１００６⁃２６７ｘ．２０１４．１２．０１２ 基于 １６Ｓ ｒＲＮＡ基因克隆文库技术分析广西 富钟水牛瘤胃产甲烷菌组成及多样性 ∗ 杨承剑　 梁　 辛　 韦升菊　 李舒露　 梁贤威 　 邹彩霞　 杨炳壮　 李丽莉 （中国农业科学院广西水牛研究所，农业部（广西）水牛遗传繁育重点实验室，南宁 ５３０００１） 摘　 要： 本研究旨在利用１６ＳｒＲＮＡ基因克隆库技术分析广西富钟水牛瘤胃产甲烷菌组成及多 样性。 选取３ 头体况基本一致的健康雌性富钟水牛作为试验动物，采用机械破壁法提取瘤胃内 容物总ＤＮＡ，采用产甲烷菌引物Ｍｅｔ８６Ｆ／ Ｍｅｔ１３４０Ｒ 扩增１６Ｓ ｒＲＮＡ 基因，构建 １６Ｓ ｒＲＮＡ 基因 克隆文库。 结果表明，本试验共获得９３ 个非嵌合体 １６Ｓ ｒＲＮＡ 序列，按照９７％的相似性划分为 ３９ 个分类操作单元（ＯＴＵ）。 其中，６０ 个序列（１５ 个ＯＴＵ）与已培养细菌１６Ｓ ｒＲＮＡ 序列相似 性≥９７％，占总序列的６４．５％；３２ 个序列（２３ 个ＯＴＵ）与已培养菌１６Ｓ ｒＲＮＡ 序列相似性处于 ９０％～（＜９７％）；仅有１个序列与Ｍｅｔｈａｎｏｍａｓｓｉｌｉｉｃｏｃｃｕｓ ｌｕｍｉｎｙｅｎｓｉｓ相似性＜９０％。 系统发育树分 析表明，９８．９％的序列均属于甲烷杆菌目（Ｍｅｔｈａｎｏｂａｃｔｅｒｉａｌｅｓ），部分序列与Ｍｅｔｈａｎｏｂａｃｔｅｒｉａｌｅｓ 中 任何已知相似序列都相隔较远，它们可能代表Ｍｅｔｈａｎｏｂａｃｔｅｒｉａｌｅｓ 中新的属或种。 由上述结果可 见，富钟水牛瘤胃产甲烷菌以Ｍｅｔｈａｎｏｂａｃｔｅｒｉａｌｅｓ 为优势菌群，其中有许多未知的产甲烷菌需进 一步分离培养并对其功能进行分析。 关键词： 富钟水牛；瘤胃；产甲烷菌；多样性 中图分类号：Ｓ８２３　 　 　 　 文献标识码：Ａ　 　 　 　 文章编号：１００６⁃２６７Ｘ（２０１４）１２⁃３６３５⁃０８ ［４］ 　 　 广西富钟水牛是我国地方水牛的特色品种之 物区系不同 。 产甲烷菌，通常也称为产甲烷古 一，２００６年被列入《国家级畜禽遗传资源保护名 ［５］ 菌，广泛存在于反刍动物胃肠道中 。 在饲料消 ［１］ 录》 。 富钟水牛体型较大，具有繁殖力高、成熟 化利用过程中，产甲烷菌能够利用各种不同底物， － ［２ ３］ 如氢、甲酸、乙酸、甲醇等，还原二氧化碳进而生成 早、肉质好、性情温顺、耐粗饲等优良特性 ，适 ［６］ 合广西壮族自治区东北丘陵地带以低洼水田及黏 甲烷 。 反刍动物的甲烷生成意味着大量能量损 ［７］ 性土壤旱地的耕作环境条件生长。 然而，据２００９ 失 。 目前已有研究显示，多种动物体内均可分