来氟米特对子宫内膜异位症大鼠作用的实验探究.pdfVIP

中文摘要 来氟米特对子宫内膜异位症大鼠作用的实验研究 摘 要 目的：本研究采用自体移植法建立大鼠子宫内膜异位症模型，观察 影响过程，检测大鼠模型异位灶中激酶转录蛋白(Transcription， factor， p-STAT)和细胞信号转导抑制因子(cellsignalinginhibitory SOCS)mRNA表达情况，探讨来氟米特对子宫内膜异位症大鼠模型的作用 机制。进一步证实免疫调节剂治疗子宫内膜异位症的策略具有可行性， 为子宫内膜异位症的临床治疗提供新的治疗策略和靶点以及实验依据。 方法： lSD大鼠子宫内膜异位症模型的建立 由河北省实验动物中心提供(合格证号：1011030)，采用自体移植法构建 动物模型。该研究符合1983年赫尔辛基宣言的原则，并得到河北医学院 伦理委员会的批准，按Vernon等的方法用自体移植法手术建模。术前5 天给予每天乙烯雌酚200mg／kg灌胃，通过雌激素催情，使所有大鼠在统 一处于动情期时开始造模。在无菌环境下，以浓度为439／L的水合氯醛 切口，逐层打开腹壁各层，分离出大鼠的右侧子宫，自远端0．5am处往 近端方向结扎子宫部分血管和需切除的子宫上下端，切取约1．5am长右． 侧子宫，去除浆膜外月1日：5肪组织，放入生理盐水中，快速纵向切开子宫 腔，切取5mm×5mm的两个片段分别缝于左右两侧腹壁，令其内膜面面向 腹壁，剩余的一块送病理确诊为子宫组织。术后连续肌肉注射庆大霉素 0．1ml／只，每天1次，共5天，预防感染。术后第5日开始乙烯雌酚每天 50mg／kg灌胃，连续5天。目的是促进移植内膜生长，提高成膜率。 2模型检测与纳入标准 模型建立的第四个星期，二剖腹探查，观察移植病变增长，按常规 建模实验方法判断子宫内膜移植成活标准：移植内膜体积增加，形成一 个浅红色或暗红色结节状球泡，被结缔组织覆盖，周围有新生血管的形 中文摘要 成，质地柔软，薄壁，内有透明液体积聚，囊泡高度超过2毫米，或病 理检查证实移植子宫内膜上皮细胞，腺体和间质生长为建模成功。取组 织活检标本送病理检查(见图lb)。 3实验分组和给药 将符合纳入标准的大鼠随机分为四组：空白对照组、来氟米特高、 低剂量组及达那唑组。药物组用药量根据《实验动物学》大鼠换算标准 白对照组无药物治疗，仅每天灌胃给予同体积0．15％羧甲基纤维素水， 给予含来氟米特的0．15％羧甲基纤维素水2ml，共3周；达那唑组按每天 25mg／kg灌胃给予含达那唑的0．15％羧甲基纤维素水2ml，共3周。 4指标检测方法 4．1测量异位灶体积 二次剖腹时游标卡尺测量异位结节长、宽、高，根据公式(体积 V=O．52 X长cm 开腹测量异位灶体积记作V：。同时取异位灶组织分别放于PE管中放入液 氮罐中保存，以备后面蛋白检测和mRNA检测。 4．2p-STAT蛋白检测 x 12000r／min离心5min，取上清，加入等体积2SDS上样缓冲液，100℃ 清液进行冷冻干燥浓缩)。进行聚丙烯酰胺凝胶电泳，每孔上样等量总蛋 白。利用水浴式电印迹法将蛋白转移至膜上。室温振荡封闭膜2h后，加 色后，立即用蒸馏水洗膜，然后将膜转入PBS中观察、照相。密度扫描 仪扫描胶片，以B—Actin蛋白灰度值为内参照，行半定量分析。 4．3细胞信号传导抑制因子(SOCS)一lmRNA检测 中文摘要 增片段为189bp，反应条件：预变性94。C 半定量分析。 5统计学分析方法 计量数据采用均数±标准差(X±S)表示，两样本的比较采用t检 验，多样本资料采用完全随机设计方差分析，组间均值两两比较用 异有统计学意义。 结果： l实验动物一般情况： 共建模成功32只大鼠，病理检查证实移植物中均有子宫内膜上皮细 lb，建模成功的异位灶大体标本见 胞、腺体和间质的生长见Figure la。在喂药期间，