破壁灵芝孢子粉对人上皮性卵巢癌裸鼠皮下移植瘤的作用.pdf

中文摘要 破壁灵芝孢子粉对人上皮性卵巢癌裸鼠皮下移植瘤的影响 摘 要 目的：卵巢癌(Ovariancancer)是女性生殖器官常见的恶性肿瘤之 一，发病率仅次于子宫颈癌和子宫内膜癌，但其病死率却占妇科肿瘤的首 位，五年生存率仅约20。30％，对妇女生命造成严重威胁。卵巢癌的病因 尚不清楚，由于缺乏早期诊断方法，就诊时大都已达晚期，其主要治疗手 段为肿瘤细胞减灭术和化疗。但常因化疗耐药而导致卵巢癌复发、转移， 导致治疗失败，甚至死亡。因此，寻找有效的抑制肿瘤生长的药物并研究 其抗肿瘤机制成为目前卵巢癌治疗研究的发展方向。中药以其低毒、高效 的优势受到国内外研究学者的广泛关注，从中草药中提取抗肿瘤成份成为 获得有效抗癌制剂的重要途径。灵芝(Ganoderma 千年药用历史的中国传统珍惜药材，具备很高的药用价值，经过科研机构 数十年的现代药理学研究证实，灵芝对于增强人体免疫力，抑制肿瘤，保 肝护肝，保护神经，调节血糖，降血脂，抗炎镇痛等方面均具有显著疗效。 lucidum 灵芝孢子(Ganoderma spore)是灵芝生长成熟期从菌盖弹射出来极 其细小的种子，为灵芝的生殖细胞，是灵芝的精华部分，具有灵芝的全部 遗传活性物质，其有效成分的含量高出灵芝75倍。目前，已有研究表明 灵芝孢子在乳腺癌、宫颈癌、白血病、肝癌、胃癌等疾病中有抗肿瘤作用， 在小鼠体内有拮抗环磷酰胺毒副反应的作用，其作为一种中药已经广泛应 用于恶性肿瘤患者。近年，研究表明破壁灵芝孢子粉对人上皮性卵巢癌细 胞具有抗癌作用，可以抑制卵巢癌细胞生长、侵袭和转移，诱导细胞凋亡， 增强卵巢癌细胞对顺铂化疗的敏感性并能逆转人卵巢癌顺铂耐药细胞株 对顺铂的耐药性。但对卵巢癌的体内研究还未见报道。本实验主要研究破 壁灵芝孢子粉及其与紫杉醇化疗药物联合应用对人上皮性卵巢癌裸鼠皮 下移植瘤的影响，为灵芝孢子在上皮性卵巢癌的临床应用提供更完善的理 论依据。 方法：l细胞培养：常规培养人卵巢浆液性乳头状囊腺癌细胞系 SKOV3，用以建立卵巢癌裸鼠皮下移植瘤模型。 2人上皮性卵巢癌裸鼠皮下移植瘤模型的建立及实验分组：取对数生 中文摘要 长期的SKOV3细胞用胰酶消化，10％胎牛血清终止消化，细胞充分分散 悬液，于无菌条件下于裸鼠背侧近后肢处皮下接种，每只0．2ml(即5× 106个)。接种后7天随机分成对照组、破壁灵芝孢子粉组、紫杉醇注射液 组、破壁灵芝孢子粉+紫杉醇注射液联合用药组进行实验。 3实验药物的制备：破壁灵芝孢子粉工作液制备：由加拿大energene 天然药品有限公司提供的破壁灵芝孢子粉溶于双蒸水，配制成75mg／ml 的灵芝孢子储存液。高温灭菌、离心后取上清，保存于4。C冰箱。紫杉醇 注射液制备：用O．9％氯化钠注射液稀释成3mg／ml浓度，即刻使用。 4给药方法：破壁灵芝孢子粉组按每只500mg／kg灌胃，每天一次， 共4周。紫杉醇注射液组按每只30mg／kg腹腔注射，每周一次，共4次。 注射液腹腔注射。对照组每天灌胃相同体积O．9％氯化钠注射液，每周腹 腔注射相同体积O．9％氯化钠注射液。 5裸鼠重量及移植瘤体积和重量的测量：每天观察裸鼠精神、活动及 大便情况，治疗第1、7、14、21、28天测量裸鼠体重和移植瘤的最长直 公式抑瘤率=(1一治疗组肿瘤体积／对照组肿瘤体积)×100％计算用药后 第7、14、21、28天抑瘤率。停药24小时终止观察，处死裸鼠，剥取瘤 组织，测量其体积并称重。 多聚甲醛固定，观察移植瘤细胞学形态变化。 7免疫组化技术检测移植瘤组织Bcl。2蛋白的表达：取部分瘤组织(小 于5×5×lmm3)用4％多聚甲醛固定，用免疫组化技术研究移植瘤组织 中Bcl．2的表达情况。 8 情况。 ． 9统计方法：采用SPSSl3．0统计学软件对实验数据进行处理。计量 资料以x±s表示，多样本均数间比较采用单因素方差分析，以尸O．05 中文摘要 0．05为差异有统计学意义。 结果：1破壁