实验十三 高温和低温对植物及伤害(综合性试验).pptVIP

一、试验目的 ?了解生长的极端温度对植物的伤害作用。 ?二、试验原理 ?植物在遭受不良环境（如高温、低温）时，原生质的结构受到影响，原生质膜的选择透性丧失，对物质的透性发生改变，盐类或有机物从细胞中渗透出，进入周围环境中。通过电导的测定和糖的显色反应，可以知道物质的外渗状况，表明植物受到伤害的情况。 三、器材与试剂 ?仪器：电导仪，电冰箱，温箱，水浴锅，烧杯，量筒，移液管，试管，镊子。 ?试剂：蒽酮试剂（1g纯化的蒽酮，溶解于1000ml稀硫酸中即可。稀硫酸由760ml浓硫酸比重（1.84）稀释到1000 ml而成），含40%三氯乙酸（TCA）的0.5%的硫代巴比妥酸（TBA）（用40%的TCA100ml溶解0.5gTBA），10 mmol/L PBS-K(pH7.4) （10mmol/L磷酸氢二钠和10mmol/L磷酸二氢钠按照81：19配置）。 ?材料：小麦种子。 四、试验步骤 1、取小麦种子用水吸胀，萌动后移到杯子上蒙着的塑料纱窗上，杯中充以水，让根穿过网孔伸入水中。苗高4cm即可用。 2、取出幼苗，尽量不要伤害到根系，用镊子除去幼苗上残留的胚乳，用蒸馏水漂洗几次，除去伤口的物质，然后以10株为一组，共三组，分别放在盛有20ml蒸馏水的小烧杯中，务必使根系进入蒸馏水中，将一杯置于45℃温箱中，一杯放在0℃温箱中，一杯放在室温下。 3、经过一定时间后，用电导仪测量每一处理小杯中的电导率。另取溶液0.5ml于试管中，加入蒽酮试剂2m，于沸水浴中加热15分钟，如果溶液变绿，说明有糖类存在。另以蒸馏水做同样测定并比较。 4、取三种不同处理的幼苗0.3g，加4ml 10mmol/L PBS-K(pH7.4)研磨，1000g离心5分钟，1ml上清液加4ml含40%TCA的0.5%的硫代巴比妥酸（TBA），100℃水浴加热30min（加盖以防过度蒸发），于冰浴中迅速冷却，10000g离心10分钟，上清液测定A532、A600、A450。据公式：MDA=【6.45*（A532- A600）-0.56* A450】*5/0.3（μM/gFW）计算幼苗中MDA含量。 五、结果与讨论 ?计算比较高温低温处理下植物受到的伤害程度。