DNA测序技术进展和其应用.pdfVIP

综述 生命科学仪器 2013第11卷／8月刊 DNA测序技术进展及其应用 刘佶 何宏 刘蓬蓬 (青岛大学医学院附属医院 山东青岛266003) 摘要 自1977年I)2Sanger~为代表的第一代测序技术确立以来，在过去的三十年里，DNA~]序技术已经取得了重要的 进展。随着大规模高通量新一代测序技术的发明，各种基因组项 目已经可以在个人实验室中完成 ，更是大大加速了生 物学领域的研究步伐。本文介绍了目前所应用的测序技术及其应用进展，并对其发展趋势进行了展望。 关键词 DNA~Jt序技术 ；Sanger~ ]1序 ；SOLiD~J序 引言 点，将ddNTP作为链终止试剂，通过DNA聚合酶的引 1977年Sanger等发明的DNA双脱氧链末端终止 物延伸产生一系列不同长度的DNA片段，再进行分 测序法 ，Maxam和Gilbert发明的DNA化学降解测 离。测定时，首先将模板分在四个DNA反应体系， 序法。，标志着第一代测序技术的诞生。其中DNA 再分别加入引物 ，DNA聚合酶，所有四种脱氧核苷 化学降解测序法主要应用于难于用Sanger法检测的 三磷酸 (dNTP)，并分别混入一定比例的带有放射性 序列 。然而随着人类基因组计划的巨大成功，人们 同位素标记的某种双脱氧核苷三磷酸 (ddNTP)。以 对测序通量的提高、成本的降低都提出了巨大的要 高分辨率凝胶电泳分离获得一系列大小不同的DNA 求 ，即使是以Sanger~生物化学原理发明的毛细管阵 片段后，就可以通过放射 自显影确定所测的DNA序 列电泳仪也远远不能满足生命科学发展的需要。因 列。经过三十年的逐步发展 ，现今传统测序技术也 此 ，发展新一代更廉价更快速更灵敏的DNA~]序技 已实现了 自动化 ，采用四色荧光染料代替放射性 术就显得尤为重要。目前，新一代测序主要包括包 核素对ddNTP的标记，毛细管电泳分离DNA片段， 括Roche公司的454技术 、Illumina公司的Solexa技 使测序的便利性 ，安全性及获得的通量均大大的 术 ，’和ABI公司的SOLID技术 。 提高了。 1 第一代测序技术 2 新一代测序技术 2003年四月，DNA双螺旋结构发现五十年的纪 尽管传统的Sanger~ ]1序具有阅读长度长，精确 念 日，高质量的人类基因组参考序列完成，而第一 度高等新一代测序技术 目前仍无法超越的优点，但 代测序技术的代表，DNA双脱氧链末端终止测序法 由于其测序通量低引起的成本高、速度慢等方面不 正是其核心技术。DNA双脱氧链末端终止测序法又 足，新一代测序技术应运而生。目前商品化的新一 称Sanger法测序 ，其基本原理 为 ：利用双脱氧核 代测序技术主要有Roche公司的454技术 、Illumina公 苷三磷酸 (ddNTP)缺乏延伸所需的3一OH基团这一特 司的Solexa~术’和ABI公司的SOLID技术 。 作者简介 ：刘佶 (1985一)，女，黑龙江省牡丹江市人 ，博士，主要从事细菌致病性的研究。 邮 箱：easyljag@126．COrn 21 综述 生命科学仪器 2013第11卷，8月刊 虽然这些新型测