紫外-可见分光光度计法测定饮料中苯甲酸钠的含量.doc

紫外-可见分光光度计法测定饮料中苯甲酸钠的含量 一、实验目的 了解和熟悉紫外-分光光度计的原理和结构，学习UV-2501的操作。 掌握紫外分光光度法测定苯甲酸钠的吸收光谱图。 掌握标准曲线法测定样品中苯甲酸钠的含量。 二、实验原理 为了防止食品在储存、运输过程中发生腐蚀、变质，常在食品中添加少量防腐剂。防腐剂使用的品种和用量在食品卫生标准中都有严格的规定，苯甲酸及其钠盐、钾盐是食品卫生标准允许使用的主要防腐剂之一，根据GB2760- 1996规定，碳酸饮料中苯甲酸钠的允许最大使用量为0.2g/kg。 苯甲酸具有芳香结构，在波长225nm和272nm处有K吸收带和B吸收带。根据苯甲酸（钠）在225nm处有最大吸收，测得其吸光度即可用标准曲线法求出样品中苯甲酸钠的含量。 三、仪器和试剂 紫外可见分光光度计 UV-2501（日本岛津），1.0cm石英比色皿，50ml容量瓶。 NaOH溶液（0.1mol/L） 苯甲酸钠标准溶液的配制 苯甲酸钠标准贮备液（1.000g/L）：准确称量经过干燥的苯甲酸钠1.000g（105℃干燥处理2h）于1000mL容量瓶中，用适量的蒸馏水溶解后定容。该贮备液可置于冰箱保存一段时间。 苯甲酸钠标准溶液（100.0mg/L）：准确移取苯甲酸钠储备液10.00mL于100mL容量瓶中，加入蒸馏水稀释定容。 系列标准溶液的配制：分别准确移取苯甲酸钠标准溶液1.00mL、2.00mL、3.00mL、4.00mL和5.00mL于5个50mL容量瓶中，各加入0.1mol/L NaOH溶液1.00mL后，用蒸馏水稀释定容。得到浓度分别为2.0 mg/L、4.0mg/L、6.0mg/L、8.0mg/L和10.0mg/L的苯甲酸钠系列标准溶液。 雪碧（500mL） 蒸馏水 四、实验步骤 吸收曲线的绘制 （1）系列标准溶液的配制 50mL瓶编号 1 2 3 4 5 6 100.0mg/L苯甲酸钠标准溶液体积（mL） 0.00 1.00 2.00 3.00 4.00 5.00 0.1mol/L NaOH溶液体积（mL） 1.00 用蒸馏水容量 50.0 系列标准溶液浓度（mg/L） 0.0 2.0 4.0 6.0 8.0 10.0 记录吸光度A值 （2）吸收曲线的测定 用某一浓度较高的标准液如4号或5号溶液，于210nm~300nm波长范围内扫描，即的苯甲酸钠的吸收曲线。 （3）由吸收曲线上找出最大吸收波长λmax。 2. 工作（标准或校正）曲线的绘制 按溶液由稀到浓的顺序分别测定他们的吸光度A，然后以浓度为横坐标，吸光度A为纵坐标作图，求出线性方程和相关系数。 0.333 0.441 0.552 0.1044 市售饮料样品溶液的含量测定 （1）准确移取市售饮料1.5ml于50mL容量瓶中，用超声脱气5min驱赶二氧化碳后，加入0.1mol/LNaOH溶液1.00mL，用蒸馏水稀释定容。 （2）按测定工作曲线标准液的方法测定样品的A，由标准曲线或线性方程求出50mL样品溶液中的苯甲酸钠的浓度。 （3）求出市售饮料中苯甲酸（钠）的含量。 五、数据处理 苯甲酸钠紫外-可见吸收光谱的测定，并找出最大吸收峰波长。 苯甲酸钠标准曲线的测定，以及曲线方程、相关系数的测定。 样品中苯甲酸钠含量的测定。 【注意事项】 试样和标准工作曲线的实验条件应完全一致。 不同牌号的饮料中苯甲酸钠含量不同，移取时样品量可酌情增减。 【思考题】 1. 紫外可见分光光度计由哪些部件构成？各有什么作用？ 答：紫外可见分光光度计由光源室、单色器、试样室、检测器及信号显示系统五个部分组成。 光源室能提供仪器使用波段的连续光谱，单色器是用以产生高纯度单色光束的装置，试样室供盛放试液进行吸光度测量之用，检测器用于检测辐射信号，信号显示系统将图谱、数据和操作条件都显示出来。 2. 本实验为什么要用石英比色皿？为什么不能用玻璃比色皿？ 答: 因为玻璃吸收紫外光，影响测试液对紫外光吸光度的准确性。而石英不吸收紫外光。因此，可见光区域内测试时需要用玻璃比色池，紫外区域内测试时用石英比色池。 3. 苯甲酸的紫外光谱中有哪些吸收峰？各自对应哪些吸收带？由哪些跃迁引起？ 答：苯甲酸具有环状共轭结构，在波长228nm 和272nm 处有 E吸收带和B 吸收带,由π→π*跃迁引起。 UV-2501的操作 开机 打开计算机，打印机。 打开主机开关，双击软件图标UVProbe，点击“Connect”与仪器联机，仪器开始自检，通过后按“OK”。 吸收光谱的测定 选择“Window”→“Spectrum”，打开光谱模块。 选择“Edit”→“Method”，设定波长范围（从大到小），扫描速度（Fast），采样间隔（