siRNA靶向沉默CXCR4基因对卵巢癌细胞增殖、迁移和侵袭力地影响.pdfVIP

前言 卵巢癌是妇科肿瘤中恶性程度最高的一种，在女性恶性肿瘤其发病率虽居第 3位，然其死亡率却居第1位，严重威胁着广大妇女的健康。卵巢癌主要来源于 卵巢上皮组织，卵巢原发性恶性肿瘤中，60％．90％属于上皮性癌，卵巢上皮性 癌是病死率最高的妇科恶性肿瘤【ll，据统计，在美国每年大约有15，000人死于 此病【2J，近年来卵巢癌在中国发病率也有逐年提高的趋势。由于其发病隐匿，缺 少有效地普查和早期诊断等措施，致使70％以上的卵巢癌患者就诊时已属晚期， 治疗及预后极差【31。确切证据表明，90％以上的肿瘤患者最终死于肿瘤的远处转 移，肿瘤的远处转移潜能是肿瘤的顽固性和难治性的根本原因。卵巢癌的转移播 散是其治疗失败的主要原因，是目前治疗上的难点。目前卵巢癌的常规治疗主要 有手术、化疗、放疗和内分泌治疗等措施【41，但这几种治疗手段都存在着疗效不 佳的问题，且患者的5年存活率始终徘徊在25％．30％左右【51，尽管其初治缓解率 较高，但仍约有60％～70％的患者会复发【6】。恶性肿瘤最基本的生物学特征是增 殖失控分化异常，并且具有侵袭转移能力。而卵巢癌具有独特的生长和转移规律， 表现在癌细胞于腹膜间皮细胞黏附、种植、形成转移灶，最终由于腹腔广泛病灶 累及网膜、胃肠道和肝脾等脏器而致患者死亡【』71。 近年研究表明，肿瘤细胞可以表达某些趋化因子或趋化因子受体，并且这些 趋化因子及其受体可能通过与炎症细胞浸润相似的机制参与肿瘤细胞的发生、发 展与侵袭过程。趋化因子受体4(CxCR4)与其配体基质细胞衍生因子．1(S仃0mal CeU de小ed触or-l，SDF．1)相互作用构成一个细胞信息传递的生物学轴，决定 着细胞的生长与转移过程。近来的研究表明，CXCR4在多种恶性肿瘤细胞中均 有表达如：乳腺癌、前列腺癌、卵巢癌等，并且与肿瘤细胞的迁移、侵袭与转移 有密切关系。研究表明上皮性卵巢癌高表达CxCR4，上皮性卵巢癌腹水及人重 组的SDF．1均对上皮性卵巢癌细胞有趋化作用，可能介导表达CXCR4的卵巢癌 细胞的腹腔内转移。目前CXCR4已成为肿瘤诊断与治疗的靶点，干扰 CXCR4／SDF．1生物轴可能是抗肿瘤治疗的一个有意义的靶点和策略，越来越多 的受到人们的重视。 基因重组技术的建立与发展为卵巢癌治疗提供了新策略，尤其是砌蛆干扰 (RN础)技术的发展为卵巢癌患者带来了新的希望。为晚期卵巢癌的治疗提供 5 了新思路。经质粒载体转染的方法比较直观并且利于操作，因此，本实验设计合 成了携带表达绿色荧光蛋白及新霉素抗性的重组质粒载体，构建了同时含3条针 对CXCR4基因特异性sil斟A干扰序列的质粒载体，经过优化转染条件，利用 察CxCR4基因沉默前后目的基因的表达情况的变化以及对卵巢癌细胞增殖、迁 移、侵袭等能力的影响。 CXCR4 干 扰 质 粒 图 CXCR4 结 构 立 体 图 6 材料和方法