抑制人PC4基因表达的siRNA载体的构建与筛选.doc

抑制人PC4基因表达的siRNA载体的构建与筛选 陶绍霖，谭群友，邓 波，康珀铭，徐 翼（400042 重庆，第三军医大学大坪医院野战外科研究所胸外科中心） [摘要]目的 构建和筛选能高效、特异性抑制人转录辅助调控因子（positive coactivator，PC4） 经酶切鉴定和基因测序分析，构建的4对重组质粒基因大小、序列与预期相符。瞬时转染293T细胞后，其中的重组pSES-HUS-PCi1质粒（正义， 5′-AACAGAGCAGCAGCAGCAGATTTT-3′; 反义， 5′-ATCTGCTGCTGCTGCTCTGTTTT-3′）能明显抑制 PC4 mRNA的表达和蛋白的合成，其抑制率分别是85.30%和80.57%。同时干扰PC4表达后293T细胞的增值和迁徙能力下降，且重组pSES-HUS-PCi1质粒组最为明显。结论 成功构建并筛选出高效、特异性抑制PC4表达的 siRNA 载体，并发现PC4能影响上皮来源293T细胞的增值和迁徙能力。 [关键词] PC4；小干扰RNA；PSES-HUS载体系统；恶性肿瘤 [中图法分类号] ［文献标志码］ B Construction of a siRNA plasmid for knockdown of PC4 Tao Shaolin，Tan Qunyou，Deng Bo，Kang