选修1 第五讲 DNA与蛋白质技术(教材专题5).pptVIP

A．将样品装入透析袋中透析12 h，若分子乙保留在袋内， 则分子丙也保留在袋内 B．若用凝胶色谱柱分离样品中的蛋白质，则分子甲移 动速度最快 C．若将样品以2 000 r/min的速度离心10 min，分子戊存 在于沉淀中，则分子甲也存在于沉淀中 D．若用SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳分离样品中的蛋白质 分子，则分子甲和分子戊形成的电泳带相距最远 解析：由图可以得出，相对分子质量由大到小的顺序是丙、丁、乙、戊、甲。凝胶色谱法分离蛋白质原理是根据蛋白质分子质量大小不同而进行分离的，相对分子质量越大，向下移动的速度越快，所以分子丙的移动速度最快。对蛋白质离心时，相对分子质量大的会沉淀在底部。在C选项所述的条件下，分子戊存在于沉淀，则丙、丁、乙应该也在沉淀中，甲比戊相对分子质量小， 不一定会在沉淀中。聚丙烯酰胺凝胶电泳中，SDS所带负电荷的量远远超过了蛋白质分子间的电荷差别，使电泳迁移速率完全取决于分子大小，因此甲和戊形成的电泳带距离较近。 答案： A 点击进入高考成功方案第3步（含课时卷） 考点二 用PCR技术扩增DNA片段 考情解读 　 本部分内容在近几年高中命题中极少出现，但是PCR技术作为前沿科技可能为今后高考提供命题的材料和情景出现，预计2013年高考可能与基因工程联系考查其原理及主要的操作要领。 [做一题] [例2]　PCR(多聚酶链式反应)技术是一项在生物体外复制特定的DNA片段的核酸合成技术，下图表示合成过程，请据图分析回答： (1)A过程高温使DNA变性解旋，对该过程的原理叙述正确 的是________。 A．该过程用到耐高温的解旋酶破坏氢键 B．该过程用到限制酶破坏磷酸二酯键 C．该过程不需要解旋酶的作用 D．该过程与人体细胞的过程完全相同 (2)C过程要用到的酶是耐高温的________。这种酶在高温 下仍保持活性，因此在PCR扩增时可以________加入，________________(需要/不需要)再添加。PCR反应除提供酶外，还需要满足的基本条件有：___________________________________________。 (3)如果把模板DNA的两条链用15N标记，游离的脱氧核苷 酸不做标记，控制“94℃－55℃－72℃”温度循环3次，则在形成的子代DNA中含有15N标记的DNA占________。 [解析]　 (1)高温所起的作用类似于解旋酶，使双链DNA变为单链。(2)C过程是PCR技术的延伸阶段，当系统温度上升到72℃左右，溶液中的四种脱氧核苷酸在耐高温的DNA聚合酶的作用下合成新的DNA链。这种DNA聚合酶在高温下不变性，所以一次性加入即可。(3)PCR技术遵循半保留复制的特点。经过三次循环，共产生23个DNA分子，其中有2个DNA分子含有15N标记。 [答案]　 (1)C　(2)DNA聚合酶　一次　不需要　DNA模板、两种引物、四种脱氧核苷酸，通过控制温度使DNA复制在体外反复进行　(3)25% [链一串] 1．PCR过程 (1)变性： 当温度上升到90℃以上时，双链DNA解聚为单链。 (2)复性： 温度下降到50℃左右，两种引物通过碱基互补配对与两条单链DNA结合。 (3)延伸： 温度上升到72℃左右，溶液中的四种脱氧核苷酸(A、T、C、G)在DNA聚合酶的作用下，根据碱基互补配对原则合成新的DNA链。 2．PCR扩增技术和DNA复制的比较 细胞内DNA复制 PCR 不 同 点 解旋 解旋酶，边解旋边复制 80～100℃高温解旋，双链完全分开 酶 解旋酶，DNA聚合酶，DNA连接酶 Taq DNA聚合酶 引物 RNA DNA或RNA 能量 ATP 不加 温度 体内温和条件 高温 细胞内DNA复制 PCR 不 同 点 子链合成 一条链连续(先导链)，另一条链不连续，先合成片段，再由DNA连接酶连接(滞后链) 两条子链均连续合成 相同点 ①提供DNA模板；②四种脱氧核苷酸做原料；③子链延伸的方向都是从5′端到3′端 [关键一点]　若没有PCR仪，可进行水浴扩增DNA，设置3个恒温水浴锅，温度分别为94℃、55℃和72℃，在3个水浴锅中依据PCR仪的处理时间来回转移PCR反应的微量离心管即可。 [通一类] 2．标准的PCR过程一般分为变性、复性、延伸三大步， 这三大步需要的温度依次是 (　　) A．92℃、50℃、72℃　　　B．72℃、50℃、92℃ C．50℃、92℃、72℃ D．80℃、50℃、72℃ 解析：当温度上升到90℃(90～96℃)以上时，双链DNA解聚为单链，称之为变性；当温度下降到50℃(40～60℃)左右时，两种引物通过碱基互补配对与两条单链DNA结合；当温度上升到72℃(70～75℃)左右时，溶液中的四种脱氧核苷酸(A、T、C