发酵工程重点整理配科学,曹军卫等著的《微生物工程》.docxVIP

微生物工程重点整理第一部分 微生物工程原理一、微生物工程概论1.生物工程包括基因工程、细胞工程、酶工程、发酵工程2.（生物化学角度）微生物细胞将有机物氧化释放出的电子直接传递给底物本身未完全氧化的某种中间产物，同时释放能量并产生各种不同的代谢产物的过程，称为发酵。机体在无氧条件下获得能量的一种方式。（微生物学角度）发酵是厌氧微生物或兼性厌氧微生物在无氧条件（或缺氧条件）下将代谢基质的不彻底氧化，并大量积累某一（或几）中代谢产物的过程。（工业生产角度）利用特定微生物的代谢活动，来生产人类需要的特定代谢产物的过程称为发酵。微生物是发酵的核心和灵魂。3. 发酵工业的发展历史：传统发酵技术——天然发酵（酒精发酵）：难人为控制过程，生产凭经验；第一代发酵技术——纯培养技术：巴斯德巴氏瓶实验证明酒精由活酵母引起，柯赫发明固体培养基、得到细菌纯培养物；第二代发酵技术——深层培养技术：青霉素（弗莱明），深层培养技术即机械搅拌通气技术，推动抗生素工业发展，石油发酵，“代谢控制发酵技术”是将生物通过人工诱变，获得代谢发生改变的突变株，在控制条件下，选择性地大量生产某种人们所需要的产品；第三代发酵技术——微生物工程（胰岛素、干扰素、生长激素、抗生素和疫苗）：基因分离、鉴定和克隆的方法，外源蛋白。4.发酵工程是工程学与微生物学的结合。利用微生物的特定性状和功能，通过现代化工程技术，生产有用物质或直接将其应用于工业化生产的一种技术体系。是建立在微生物发酵工业基础上，与化学工程相结合而发展起来的一门学科。发酵工程又称微生物工程。二、生产菌种的来源1. 发酵工程三要素：生产菌种的性能、发酵及提纯工艺条件、生产设备2. 分离纯化和筛选步骤：标本采集→标本材料的预处理→富集培养→菌种初筛→菌种复筛→性能鉴定→菌种保藏。3. 采样的注意事项：采样时应尽可能保持相对无菌；所采集的样本必须具有某种代表性；采好的样必须完整地标上样本的种类及采集日期、地点以及采集地点的地理环境条件、生态参数等，以备查考；采样的季节性和时间因素（真正的原地菌群的出现可能是短暂的）；为减少微生物数量和类型变化，采好的样及时处理，暂不能处理的应贮存于4℃下，但贮存时间不宜过长。4. 纯种分离方法：平板划线分离法；平板稀释分离法；涂布分离法等。5. 菌种分离：施加选择性压力分离法（富集培养）；随机分离法：抗生素产生菌、抗肿瘤产生菌、酶抑制剂产生菌、抗病毒药物产生菌、生产因子产生菌。6.氧控制：好氧微生物、厌氧微生物。高温：嗜热微生物、非嗜热微生物。pH条件：酸微生物、嗜碱微生物7.施加选择性压力培养法：分批式富集培养（摇瓶培养）：转种的时间是关键；恒化式富集培养（连续培养）：稳定混合菌群。8.固体培养基常用于分离各种酶产生菌9.抗生素产生菌的筛选和分离：稀释法、扩散法、生物自显影法和抑菌圈法等。10.几种重要生物活性物质产生菌的分离方法:抗肿瘤药物产生菌：利用DNA修复能力突变株进行抗肿瘤药物的筛选。酶抑制剂（药物）产生菌：某种化合物能在体外抑制某种关键的人体酶，它就可能在体内有药理作用。故主要选择与生理和病理关系明确的酶为靶酶进行筛选。抗病毒药物产生菌：用小平板测定由病毒引起的细胞变性效果，是一种有用的筛选方法；检测病毒复制中特有的DNA复制酶和核酸合成酶的酶抑制剂，是另一种选择性更高的筛选方法。生长因子产生菌：通过观察分离菌能否促进营养缺陷型菌株的生长来检出。免疫激活剂产生菌：可以用细胞表面酶的抑制法，筛选免疫激活剂产生菌。多糖产生菌：可以通过菌落外观的观察来识别（黏稠)三、微生物的代谢调节和代谢工程1.代谢调节：涉及多个基因的基因工程，也称途径工程。包括酶活性调节（酶的激活作用（变构调节、化学修饰调节）、酶的抑制作用）、酶合成的调节、分支生物合成途径的调节（同工酶、协同反馈抑制、累积反馈抑制、顺序反馈抑制、联合激活或抑制调节、酶的共价修饰）、能荷调节。调节方式包括反馈调节、反馈阻遏、酶的诱导调节、酶的共价修饰等。代谢类型：分解代谢、合成代谢2.微生物自我调节的部位：细胞膜的调节、限制基质的有形接近（真核生物）、酶量和酶活性的调节（原核生物）3.酶活性调节:指一定数量的酶，通过其分子构象或分子结构的改变来调节其催化反应的速率。影响因素：底物和产物的性质和浓度、环境因子（如压力、pH、离子强度和辅助因子等、其他的酶的存在。调节方式：激活已有酶的活性、抑制已有酶的活性。4.酶的激活作用：某个酶促反应系统中，某种低分子质量的物质加入后，导致原来无活性或活性很低的酶转变为有活性或活性提高，使酶促反应速率提高的过程。酶的激活剂或抑制剂：：能引起酶活力提高（或获得）或降低（或丧失）的物质（外源物质或机体自身代谢过程中产生与积累的产物）。酶的抑制作用：某个酶促反应系统中，某种低分子质量的物质加入后，导致