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第二章 餐厨垃圾堆肥产酶菌株筛选 2 材料与方法 2.1 材料 2.1.1 实验材料 1）筛选材料：HM菌剂（河南恒隆态生物工程股份有限公司）；EM菌剂（江西天意集团）；金宝贝菌剂（北京华夏康源科技有限公司）；群林发酵剂（广西北海群林生物工程有限公司）。 2）发酵材料：餐厨垃圾（购自贵州大学南校区学生食堂）；稻草（购自铜仁市，晒干后粉碎至5mm左右）。 2.1.2 主要药品及试剂 2.1.3 实验仪器 电子分析（EL-2005） 西特传感技术有限公司 高速台式离心机（TGL-161） 冷冻离心机（2-16k） 德国eppendorf公司 标准型净化工作台 上海锦星科学仪器有限公司 低温冰箱〔BCD-108E） 风华电器厂 超低温冰箱(Forma-6C ULT) Thermo公司 调温调湿箱（WS/08-01） 重庆试验设备厂 干燥箱（101-2） 上海实验仪器总厂 自动三重水蒸馏器（SZ-97） 上海亚荣生化仪器厂 高压灭菌锅（GMSX-280） 英国阿斯太欧（Astell）公司 循环水浴锅（RET7） Thermo公司 1） （1）细菌培养基（%）：牛肉膏0.3；蛋白胨1.0；氯化钠0.5；琼脂粉2.0；pH7.2 2）霉菌培养基（%）：磷酸二氢钾0.1；七水硫酸镁0.05；蛋白胨0.5；葡萄糖1.0；琼脂粉2.0；孟加拉红0.03；pH自然；链霉素30μg/m （3）乳酸菌培养基（%）：蛋白胨1；牛肉膏1；酵母膏0.5；柠檬酸二铵0.2；葡萄糖2.0；吐温80 0.1；乙酸钠0.5；三水磷酸氢二钾0.2；七水硫酸镁0.058；七水硫酸锰0.025；琼脂粉2.0；pH6.2 4）放线菌培养基（%）：可溶性淀粉2；氯化钠0.05；硝酸钾0.1；磷酸氢二钾0.05；七水硫酸镁0.05；七水硫酸亚铁0.001；重铬酸钾0.015；琼脂粉2.0；pH7.4；青霉素3μg/ml ） （1）产淀粉酶筛选培养基（%）：可溶性淀粉0.2；蛋白胨1.0；酵母膏0.5；磷酸氢二钾0.3；七水硫酸亚铁微量；七水硫酸镁微量；琼脂粉2.0；pH7.0 （2）产脂肪酶筛选培养基（%）：硫酸铵0.1；磷酸氢二钾0.1；氯化钾0.05；七水硫酸镁0.01；橄榄油1.0；聚乙烯醇0.1；琼脂粉2.0；pH8.5 （3）产纤维素酶筛选培养基（%）：七水硫酸镁0.01；羧甲基纤维素钠1.5；氯化钙0.01；磷酸二氢钾0.05；硫酸铵0.2；磷酸氢二钾0.2；pH自然 产酶发酵液 1）产淀粉酶发酵液（%）：可溶性淀粉0.5；蛋白胨0.5；酵母膏0.5；氯化钠0.1；七水硫酸亚铁微量；七水硫酸镁微量；pH7.0（48h培养） （2）产脂肪酶发酵液（%）：蛋白胨2.0；葡萄糖0.58；橄榄油乳化液4；硫酸铵0.1；七水硫酸镁0.05；磷酸氢二钾0.1；pH自然（72h培养） 3）产纤维素酶发酵液：A液：葡萄糖0.4g；七水硫酸镁0.25g；CMC-Na 0.5g；水89m; B液：磷酸氢二钠6.0g；氯化钠0.5g；磷酸二氢钾3.0g；氯化铵1.0g；水100m; C液：氯化钙0.11g；水100m 灭菌后10mB液+1mC液+89mA液即为发酵液 基础培养基（%）： 蛋白胨1.0；酵母膏0.5；氯化钠1.0；琼脂粉2.0；pH7.0 4%聚乙烯醇溶液称取40g聚乙烯醇(PVA）加蒸馏水约800m，在沸水浴中不断搅拌使其完全溶解，冷却后定溶至1000m，再经纱布过滤后备用橄榄油乳化液的配制取4%聚乙烯醇溶液150m，加50m橄榄油，高速组织搅动机搅动6min(分次搅动，每次min，中间休息5min中)，即制成乳白色的乳化液。 0.05mol/L Na OH溶液配制： 取4.58g固体Na OH溶于1L水中，用邻苯二甲酸氢钾标定，使用时稀释10倍。 酚酞溶液配制： 取1g酚酞溶于100mL 95%的乙醇中即得10g/L的酚酞溶液；取0.5g酚酞溶于100mL 95%的乙醇中即得5g/L的酚酞溶液【GB/T 603-2002化 学 试 剂试验方法中所用制剂及制品的制备】 Na2CO3-NaHCO3缓冲液配制： 0.1mol/L，pH10。0.1mol/LNa2CO3溶液：称取28.62g Na2CO3·10H2O溶解、定容至1L，即为0.1mol/LNa2CO3溶液；0.1mol/LNaHCO3溶液：称取8.40gNaHCO3溶解、定容至1L，即为0.1mol/LNaHCO3溶液。使用时将Na2CO3溶液与NaHCO3溶液1:1混合即得0.1mol/L，pH10的Na2CO3-NaHCO3缓冲液。 1%CMC-Na溶液配制： 称取1gCMC-Na溶解定容至100mL即得。 DNS试剂配制： 称取酒石酸钾钠182.0 g，于500 mL 蒸馏水中