084120048杨红琴哺乳动物组织基因组DNA提取(GenomicDNAExtractionfromMammalTissue).doc

本科学生综合性实验报告 学号 084120048 姓名 杨红琴 学院 生命科学学院 专业、班级08生物科学A班 实验课程名称 分子生物学实验 教师及职称 倪娟（助理实验师） 开课学期 2010 至 2011 学年 下 学期 填报时间 2011 年 5 月 27 日 云南师范大学教务处编印 一、实验设计方案 实验序号 3 实验名称 哺乳动物组织基因组DNA提取（Genomic DNA Extraction from Mammal Tissue） 实验时间 2011年5月24、25日 实验室 实验目的： After the experiment is finished, students should be able to extract genomic DNA from mammal tissue, and to run an agarose gel. （1）、掌握动物基因组DNA提取的操作方法； （2）、掌握琼脂糖凝胶电泳的操作的方法。 2、实验原理、实验流程或装置示意图： （1）、实验原理： ·The detergents SDS ( sodium dodecyl sulfate) is added to denature proteins and solubilize lipids in membranes leading to cell lysis . The cell lysate is often treated with enzymes that hydrolyze RNA and proteins. 本实验利用去垢剂SDS(十二烷基磺酸钠)是为了使蛋白变性并溶解细胞膜中的脂质从而导致细胞裂解，而细胞裂解物又常用蛋白酶K进行水解处理。 ·Then they are treated with phenol and chloroform to remove the remaining proteins, which will either enter the organic phase or, if they had denatured, appear at the interphase. Alcohol help to concentrate the DNA while removing nucleotides, amino acids, oligonucleotides and peptides. 随后用酚︰氯仿进行抽提，以去除残留的蛋白质，这时蛋白质将进入有机相，或者假如己变性的话将呈现在有机相与水相之间。乙醇沉淀处理则可以浓缩DNA，同时去除核苷酸、氨基酸以及低分子量的寡核苷酸和肽。 ·We can add the eathylene diamine tetraacetic acid (EDTA) to keep the integrity of DNA. EDTA can chelate Mg2+ and reduce deoxyribonuclease (DNase) activity, because these enzymes require Mg2+ to work. 为了进一步保护DNA样品的完整性，通常需要在缓冲液中添加乙二胺四乙酸(EDTA)以整合Mg2+，这样将会减少脱氧核糖核酸酶(DNase)的活性，因为该酶必须在有Mg2+存在时才会起作用。 ·本实验方法分离得到的染色体DNA长度为100-150kb，适用于构建基因组文库和Southern杂交分析。如果要求得到较大分子量的DNA，则必须省略其中的振荡步骤。 真核生物染色体DNA组装不同层次的结构 （2）、核酸的分离纯化、测定及研究方法 ·分离核酸的一般原则 因为遗传信息全部贮存在核酸的一级结构中，故完整的一级结构是保证核酸结构与功能研究的基础。 核酸的分离和纯化时应遵循两个原则① 保证核酸一级结构的完整性；② 排除其它分子的污染。 核酸的纯度要求 ① 核酸样品中不应存在对酶有抑制作用的有机溶剂和过高浓度的金属离子； ② 其它生物大分子如蛋白质、多糖和脂类分子的污染应降低到最低程度； ③ 排除其它核酸分子的污染，如提取DNA分子时，应去除RNA，反之亦然。 ·核酸分离纯化的一般步骤： 破碎细胞→去除蛋白质、多糖、脂类等生物大分子→沉淀核酸→去除盐类、有机溶剂等杂质→纯化干燥→溶解。 核酸提取方案，应根据具体生物材料和待提取核酸分子的特点而定。对于某特定细胞器中富集的核酸分子，采用先提取细胞器