FACSCOUNT中文操作手册.PDF

FACSCount 中文操作手册 目录 第一章 介绍 ……………………………………. 3 第二章 仪器安装…………………………………10 第三章 开机………………………………………11 第四章 质控品的制备和上机……………………18 第五章 病人标本的制备和上机…………………30 第六章 清洁和维护………………………………38 第七章 故障处理…………………………………47 附录A 反向加样…………………………………71 附录B 系统性能…………………………………73 附录C 期望结果………………………………….74 2 第一章 介绍 1.1 概要和说明 用途 FACSCount 系统是Becton Dickinson 公司生产的自动化仪器与试剂，特别设计用来计数未裂 解全血中的CD4，CD8 和CD3 T 淋巴细胞绝对数量。 操作原则 每一个样品的测试都需要一对拿来即可使用的试剂管对：其中一管用来计数辅助性/诱导 T 淋巴细胞（CD4/CD3 ），另一管计数抑制性/细胞毒性T 淋巴细胞（CD8/CD3 ）。这两管都会 测量总 T 淋巴细胞（CD3 ）的绝对数。只要进行简便的全血染色步骤之后，就可使用 FACSCount 上机测试，仪器上的屏幕会显示出操作指导。该程只需要很简便的样本处理。 制备样品时，当把全血加入到试剂管中，试剂中的荧光标记抗体会特异地与淋巴细胞表面的 抗原相结合。然后在试剂管中加入固定液，样本即可上机测试了。当细胞经过激光照射，标 记在细胞上的荧光染料发出相应的荧光。仪器则根据所发的荧光进行细胞计数。 试剂管中除了包括抗体外，还有已知数量的荧光素标记的参考微球。这些微球作为荧光标准， 可以定位淋巴细胞，同时也是细胞计数的定量标准。 仪器会自动进行分析，软件可以鉴别出 T 淋巴细胞亚群并计算出绝对数值。标本测试后立 即即可打印出结果，包括CD4 （辅助性/诱导T 淋巴细胞）、CD8 （抑制性/细胞毒性T 淋巴 3 细胞）、CD3 （总T 淋巴细胞）的绝对数值，还有CD4/CD8 （辅助性/抑制性T 淋巴细胞） 比值。 传统方法 传统的，淋巴细胞亚群的绝对值由淋巴细胞亚群百分比乘一定体积血液中的淋巴细胞数得出 的。所以获得淋巴细胞亚群绝对数值的方法包括了将血样等分，化验，和分析用手段等。为 了测定总淋细胞数量需用手工或血细胞计数仪来计数总白细胞（WBC ）和各类白细胞的数 量。淋巴细胞亚群百分比是由一等分血样经过直接或间接免疫荧光标记，用流式细胞仪或显 微镜得出的。然后将淋巴细胞亚群百分比乘以总淋巴细胞绝对数得到淋巴细胞亚群的绝对 数。但这种经过多步骤测定方法得到的结果很容易增加实验误差。 临床应用 CD4，CD8 和CD3 T 淋巴细胞绝对数一般用来评估病人或有可能发展为免疫缺陷疾病如获 得性免疫缺陷综合症（AIDS ）的人的免疫功能状态。 CD4 抗原是人免疫缺陷病毒（HIV ）的受体，CD4 T 淋巴细胞绝对数是与HIV 疾病进程和 病人诊断最相关的细胞参数。 CD4/CD8 T 淋巴细胞比值即辅助性/抑制性T 细胞的比值。HIV 感染后CD4 T 细胞相对比例 下降，CD8 T 淋巴细胞相对比例增高，导致辅助性/抑制性比值下降。 1.2 需要的设备和物品 以下是FACSCount 系统运行时需要的物品。随机提供的材料和备用物品的详细列表，见附 录B 。 随机附带的物品 这些物品是随机提供的，在标本制备和上机测试时需要用到。（图1-2 ） 4  FACSCount Coring Station － 用来打开试剂管和质控管的设备。  FACSCount Electronic Pi