氟苯尼考在南美白对虾体内药物代谢及残留消除规律.docVIP

氟苯尼考在南美白对虾体内药物代谢及残留消除规律 郑重莺，丁雪燕，张海琪，薛辉利，姚高华，何 丰 （浙江省水产技术推广总站，浙江 杭州 310012） 摘要：研究了南美白对虾口服氟苯尼考药饵给药后，在血液、肌肉中的残留及消除规律，采用Agilengt 1100型液相色谱仪测定组织中药物含量. 口服给药后血液中氟苯尼考浓度在1 h立即达到峰值，药物开始向肌肉组织中运转，血药浓度在1 h后下降，而肌肉中浓度达到峰值；此后无论血液还是肌肉中氟苯尼考浓度均缓慢下降，到10d后血液中的氟苯尼考不能检出. 口服氟苯尼考后，在南美白对虾体内吸收快，血药浓度高；药物在肌肉中消除缓慢，维持时间长. 关键词：氟苯尼考；血液；肌肉；药代动力学 氟苯尼考(florfenicol)是种氯霉素类广谱抗菌药物，于1999年被批准投入使用于防治细菌性疾病，由于其结构中不含氯霉素中抑制骨髓造血机能有关的—NO2基团，大大降低了对动物和人体的毒性，在安全性和有效性方面比氯霉素和甲砜霉素具有明显的优势[1]. 目前氟苯尼考已成为专用于水产饲料的替代常规氯霉素抗生素类药物之一，广泛应用于防治细菌性疾病，国内外已有氟苯尼考在虹鳟(Oncorhynchus mykiss)[2]、鳕(Gadus morhua)[3]、中国明对虾(Fenneropenaeus chinensis)[4]、中华鳖(Trionyx smells)[5]和几种淡水鱼(河鲶、湖鲟、湖鳟、杂交条纹鲈等)[6]等水产动物上的研究报道. 本次实验首次研究并探讨了氟苯尼考在南美白对虾血液和肌肉中的代谢情况及合理休药期，为水产用药提供理论依据. 1 材料与方法 1.1 试样材料 氟苯尼考标准品，纯度≥99.0%，Augsburg公司生产. Agilent1100型高效液相色谱仪(二极管阵列检测器)，电子天平、离心机、恒温振荡器、真空旋发仪. 试验用对虾平均规格8.35cm、7.48g，由杭州下沙周宏水产养殖场提供. 配合饲料购自宁波天邦科技股份有限公司(原料经测定不含任何抗生素)，按2‰比例在空白饲料中添加氟苯尼考，制成药饵. 1.2 方法 1.2.1 给药 殖场育苗室8m2小型水泥池中进行. 对虾放养后第二天开始进食，稳定2d后，开始投喂药饵，投喂5d后抽样并改喂普通饲料. 试验期间饲料1d投喂2次，水深保持30～40cm，水温21.5～16℃，比重1.0020，pH值7.8，并视水质情况适量换水和泼洒少量微生物制剂，及时清除残饵和死虾. 1.2.2 缓冲液、流动相和标准溶液的配制 磷酸盐缓冲液(pH值7.0)：准确称取磷酸氢二钠7.164g和磷酸二氢钠2.76g，用超纯水中溶解并定容至100mL，浓度均为0.2mol·L-1，然后按磷酸氢二钠:磷酸二氢钠=61:39(V/V)的比例混合即成. 流动相：乙腈:水=27:73(V/V). 准确称取氟苯尼考10(1±0.1)mg，流动相定容至10mL，浓度为1mg·mL-1，实验过程按要求用流动相稀释到适当浓度，备用，保存期3个月. 1.2.3 样品采集 以5d药饵投喂结束后的1h作为起始时间，从该时刻起按0.5h、1h、2h、4h、8h、24h、48h、72h、96h、120h、168h、240h、480h时间段，每次随机抽取对虾样本10尾，提取对虾的血液、肝胰腺、肌肉，于－18℃保存备用. 为防止血液凝固，放置和提取血液的离心管和针筒均用0.2％肝素钠处理后使用. 1.2.4 样品处理 称取泥状样品1.0g于20mL离心管中. 加入1mL磷酸盐缓冲液，4mL乙酸乙酯，均质后超声提取30min，5000r·min-1离心10min，取上清液于另一玻璃离心管中. 残渣中再加入4mL乙酸乙酯，重复提取一次，合并上清液. 40℃水浴氮气吹干，加入1mL流动相，1.0mL正己烷，涡动2min溶解离心管中的残留物，4000r·min-1离心15min，弃去正己烷，下层过0.22μm滤膜，待测. 1.2.5 色谱条件 ODS C18柱；柱温30℃；流速1.0 mL·min-1；进样量20μL；紫外检测波长为224nm；流动相：乙腈:水=27:73(V/V). 1.2.6 回收率的确定 将10μg·mL-1、20μg·mL-1、50μg·mL-1氟苯尼考标准液1mL加入空白样品10.0g，按1.2.5方法处理后，上机测定. 每个水平重复5次.计算绝对回收率. 绝对回收率＝(预处理后样品的药物峰面积÷溶于流动相的药物峰面积)×100％. 2 测定结果 2.1 氟苯尼考线性范围和灵敏度 用浓度为0.05、0.5、1.0、5.0、10.0μg·mL-1标准液上机测定.结果表明，氟苯尼考在0.05～10.0μg·mL-1范围内线性关系良好，相关系数r＝0.99999. 将引起三倍基