神经病理性疼痛大鼠脊髓背角一氧化氮合酶各亚型及表达.doc

神经病理性疼痛大鼠脊髓背角一氧化氮合酶各亚型的表达及活性 金小高 罗爱林 华中科技大学同济医学院附属同济医院麻醉学教研室430030 摘要 [目的]在神经病理性疼痛大鼠模型脊髓背角中升高的NO可以促进兴奋性递质的释放，因而NO被认为是一种致痛物质。然而脊髓中的NO有时在抑制炎性反应、降低神经元的兴奋性、促进镇痛药物的镇痛作用取着重要的作用。但是对于神经病理性疼痛模型大鼠脊髓背角中神经型（NOS1）、诱导型（NOS2）和内皮型（NOS3）一氧化氮合酶的表达及活性差异尚不完全清楚，本试验目的在于比较神经病理性疼痛大鼠模型脊髓背角三种类型NOS的mRNA表达及其活性差异。 [方法] 选择雌性SD大鼠（150-200g ）20只，随机分为4组，每组10只，一组为对照组， 另一组制备SNI疼痛模型。术后观测疼痛的变化，疼痛模型成功后，于术后第14日断头处死，分离L4-6段脊髓，－80oC储存备用。对照组和SNI疼痛模型组各取5只大鼠脊髓，使用Trizol提取RNA，逆转录后，使用PCR技术扩增NOS1、NOS2和NOS3片段，以β-actin为内参照，比较SNI组与对照组NOS表达的差异。对照组和SNI疼痛模型组各取5只大鼠脊髓，使用生理盐水，冰上迅速匀浆，测定蛋白浓度，各取40μg的蛋白，使用一氧化氮合酶亚型催化活性检测试剂盒，依照组成型NOS（NOS1和NOS3）和诱导型NOS活性对Ca2＋的依赖性不同，分别检测组成型和诱导型NOS的活性。 [结果] SNI疼痛模型组NOS1、NOS2的mRNA表达均高于对照组，差异具有显著性（P0.05），而NOS3的表达俩组之间差异并无显著性（P0.05）。一氧化氮合酶亚型催化活性检测显示组成型和诱导型NOS的活性均高于对照组，差异具有显著性（P0.05）。 [讨论] 试验结果显示神经病理性疼痛大鼠模型脊髓背角中NOS1与NOS2不仅mRNA表达升高，而且催化合成NO的活性也都加强了。但是NOS1的活性受细胞内钙离子调节，产生NO的量以nmol计；NOS2合成后就与钙调蛋白紧密结合，不受细胞内钙离子的影响，产生NO的量以μmol计。 增加了组织内的氧化压力，NO被氧化生产ONOO-、N2O3和NO－，这些氧化产物具有细胞毒性作用。NOS2在神经元、胶质细胞中都可能表达，特别是激活的胶质细胞中，表达更丰富。在神经病理性疼痛中星形胶质细胞和小胶质细胞对疼痛的发生发展起着重要的作用，NOS2合成的NO在二者相互激活的过程中起着关键作用。 NOS1主要在神经元表达，在神经病理性疼痛中所起的作用有其不确定性，一方面，神经病理性疼痛时NOS1表达升高，合成NO增多，NO可以促进神经兴奋性递质谷氨酸释放增加，有助于疼痛的产生；另一方面，NO可以抑制谷氨酸受体，降低神经元的兴奋性，神经元间的NO可以抑制单胺类转运体，增加细胞间的单胺类递质，单胺类递质可以抑制兴奋性氨基酸的释放，并且NO参与了吗啡、可乐定和新斯的明在脊髓的镇痛作用，抑制NOS1的活性，将降低这些药物的镇痛作用。 NOS1与NOS2也存在着关联性，研究表明NOS1或NOS3产生一定量的有一定的抗炎作用，包括抑制NOS2的活性。这与一定量的NO可以改变NF-κB的构形，抑制其与DNA结合的活性有关。 NOS1与NOS2在神经病理性疼痛中的作用尚不清楚，特别是NOS1，要了解他们在疼痛中作用，需要更深入的研究。