基于共价色谱分离的含半胱氨酸肽段富集策略.PDF

! # 年! 月 !#$ !$ %$ ! ’()*+), ! # !#$%% ’()*$+, (- !*(.+/(0*+1 2 #$ % ## 特别策划 -./ ：# $ ’(!0 12 $ 3 $ ##!’ $ ! # $ #$ 基于共价色谱分离的含半胱氨酸肽段富集策略 # # ! ! ! ! ! 米- 薇 ，- 王- 晶 ，- 应万涛 ，- 贾- 伟 ，- 蔡- 耘 ，- 钱小红 （#$ 中国计量科学研究院生物能源环境所，北京 # #’ ； ! $ 蛋白质组学国家重点实验室，北京蛋白质组研究中心，北京放射与辐射医学研究所，北京 #!!, ） 摘要：多维色谱分离、串联质谱分析技术已在蛋白质组研究中得到广泛应用。然而生物样品的蛋白质以及全酶切 肽段具有高度的复杂性，这严重干扰了蛋白质高通量、规模化的分析。通过标签肽段富集进行样品预分离可以降 低体系的复杂程度。本文建立了一种基于共价色谱技术选择性分离富集含半胱氨酸肽的方法，从而降低了样品体 系的复杂程度。首先以牛血清白蛋白（?1C ）的酶切肽段为模型，对富集条件进行了优化和考察，并在此基础上通 过) 种蛋白质酶切肽段混合物的富集对该方法进行了验证。结果证明此方法的重现性好，富集效率高，富集特异 性好，能有效地富集鉴定含半胱氨酸肽段。所建立的方法在复杂体系的蛋白质组研究中具有广泛的应用前景，为 复杂样品的蛋白质高通量、自动化、规模化鉴定和定量研究提供了实用技术。 关键词：共价色谱；液相色谱6 串联质谱；含半胱氨酸肽；富集；蛋白质组 中图分类号： .,)$- - - 文献标识码：C- - - 文章编号：#6$( #’ （! # ）!6 #$6( !#$%’() *)#+)(,- ./ %-*)($(0%.)+$$, 1(1)$2(* 3+*(2 . %.4+5() %#.’+).,#+1- D/ E’8# ，EC%F 38:G # ，H/%F E+:I+! ，3/C E’8! ，C/ H*:! ，J/C% B8+:G! ! （!! #$ % ’( #) ’ *+ , -*.*/0 ，1)#/0 %)2 1)3-*)( #) ’ ，4 %’-*)%. 5)6 ’-’7 ’# *+ 8 #’*.*/0 ，, #-9 -)/ !!# ，:;-)% ； $ ! ’%’# = #0 %?*%’*0 *+ @ *’#*(-A6 ，, #-9 -)/ @ *’#*( # B #6#%A; :#) ’# ，, #-9 -)/ 5)6 ’-’7 ’# *+ B %2-%’-*) 8 #2-A-)# ，, #-9 -)/ !$$% ，:;-)% ） 63*)#+%) ：C*I7+I’K 7*#I8K87’:@8:+# #89*8K =)7+IG)+L,6I+:K’7 7+@@ @L’=I)7’I), （M6 D10 D1 ）8@ )*I8:’#, +LL#8’K 8: #+)G’ @=+#’ L)I’7’ L)N8#8:G $ OP’Q’) G#(+# L)I’7’ +:+#,6 @8@ )’7+8:@ + I’=:8=+# =+##’:G’ K*’ I