内共生菌Wolbachia对灰飞虱的生殖调控作用及其及WO+phage相互作用关系的的分析研究.pdfVIP

摘 要 内共生菌Wolbachia对灰飞虱的生殖调控作用及其与 WO phage相互作用关系的研究 摘 要 灰飞虱(Laodelphaxstriatellus)、白背飞虱(Sogatellafurcifera)和褐飞虱 (Nilaparvata 的水稻害虫，通过直接刺吸和传播病毒对水稻生产造成很大影响。Wolbachia是广泛 存在于节肢动物体内的一种共生细菌，可通过宿主卵的细胞质进行母系遗传，并以诱 导胞质不亲和(cytoplasmic 雌生殖(parthenogenesis 寄主的生殖以实现其在宿主种群中的稳定存在和扩散。 噬茵体是以细菌为宿主的病毒，有高度的宿主特异性，是细菌遗传进化的重要推 动力。W0 phage是Shinjit和Masui(2000)在Teleogryllus 基因组中首次发现并命名的．WO噬菌体既能以溶原状态插入到其宿主的染色体中， 又可以裂解状态自由存在于细胞质中，因此可能携带重要的基因到Wolbachia中或参 与Wolbachia调控宿主生殖方式。本文以中国两个地理种群灰飞虱为实验材料，研究 了共生菌Wolbachia对中国灰飞虱生殖作用的影响。同时本文以灰飞虱、白背飞虱、 WO在其Wolbachia宿主中的的感染情况以及与Wolbaehia的相互作用关系。 本研究的主要内容以及取得的初步研究成果如下： 1．为检验Wolbachia对中国灰飞虱生殖的影响，本研究以广西壮族自治区南宁市 (NN)和云南省宁洱市(NE)两个地理种群为实验材料，通过四环素处理筛选到完 全不感染Wolbachia的品系后再与感染品系进行杂交实验。结果发现，这两个地理种 群灰飞虱中感染的Wolbachia都能够诱导高强度的胞质不亲和作用(CI)，表现为胚胎 的死亡及产卵量的犬幅度下降。 2．本研究通过PCR检测编码WO噬茵体衣壳蛋白的D形基因首次报道了在三种 稻飞虱体内存在WO phage对Wolbachia的侵染，并通过分子克隆分析了WOphage 的类型。结果表明，试验中20个稻飞虱中的Wolbachia普遍存在着WO phage的感染， 感染率为47％～96％；g等。对不同地理种群感染的WO phage的ory7基因序列分析可 内共生菌Wolbachia对灰飞虱的生殖调控作用及其与WO phage相互作用关系的研究 知共有三种不同类型的WO噬菌体，其序列分别登录到Genbank。 3．通过对20个地理种群稻飞虱体内感染的Wolbachia wsp基因及WOphage的 0硝7基因进行克隆测序并进行系统发育分析，比较两个系统发育树的拓扑结构发现二 者表现出很明显的不一致性，由此说明WO phage和肋Z6口砌妇两者的系统发育关系 相关性并不明显：同时发现地中海粉螟和灰飞虱中感染的WO phage位于同一进化支 内，说明WO噬菌体在不同宿主的Wolbachia之间可能发生了水平转移，由此可推断 WO噬茵体可能会像其他胞外细菌的噬菌体那样参与促进Wolbachia的遗传进化。这 是在稻飞虱体内对WO phage的首次报道和研究，为以后进一步深入研究奠定了基础． 4．本研究设计特异性引物，利用real-time PCR技术检测了灰飞虱， quantitative 白背飞虱、褐飞虱体内感染的Wolbachia和WO 和W0 phage在三种稻飞虱体内的总体分布情况；另外还比较了不同日龄的灰飞虱雄 虫体内Wolbachia和WO