基因工程 第一章 基的因工程概况.pptVIP

基因工程原理principles of gene engineering;第一章 基因工程概况;一.基因工程含义 按照人们的愿望，进行严密的设计，通过体外DNA重组和转基因等技术在较短时间内有目的地改造生物种性或生产生物产品，创造出更符合人们需求的新的生物类型。;;再例如 ;转入绿色荧光蛋白基因的小鼠在暗背景下可发出绿色荧光。;中国科学家将人的岩藻糖转移酶基因转入奶牛，获得的转基因牛于2003出生, 其牛奶中含有岩藻糖转移酶，可用于治疗胃病。;二、基因工程的理论基础;Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.;2、基因是可切割的 基因可被限制性核苷酸内切酶切开。 ;3、基因是可以转移的. 基因可在不同染色体、细胞和物种间转移。;5、遗传密码的通用性 允许其在不同生物中表达。可以人工合成。;三、基因工程的基本技术路线;黑曲霉基因组DNA;Cycle Plasmid DNA vector;1 准备阶段 1944，Avery 证明DNA是遗传物质，是基因的载体. 1953, Watson and Crick: 证明 DNA 的双螺旋结构. 1958-1971, 提出中心法则，破译遗传密码 60’s-70’s, 发现核苷酸内切酶和DNA连接酶，质粒被用做载体进行基因转移。;2 基因工程的问世 1973年，Cohen将非洲爪蟾核糖体基因与质粒pSC101 重组转入 E. coli., 并证明该基因可转录。;3 基因工程的发展 在近40 的时间里，基因工程飞速发展. 3.1建立了一整套相关技术: 例如： 体外扩增基因片段：Polymerase Chain Reaction (PCR) DNA的体外重组技术 细菌、动植物基因转化技术等;3.2 获得了一系列的基因转化载体 : 例如：各种质粒，病毒载体等 3.3 获得了大量转基因生物. 转基因细菌 (E.coli. ) 转基因动物 (mouse, cow, sheep, pig) 转基因植物( tobacco, potato, tomato, cotton,rice) ;1.2 基因工程的研究内容;2、基因工程受体的研究 受体 (receptor)：基因转化的对象 Bacteria : 大肠杆菌（E.coli）、蓝细菌 (cyanobacteria ) Fungi :酵母菌 (yeast)单细胞的 Plant:愈伤组织(callus), partial tissue or organ Animal :生殖细胞(reproductive cell),胚细胞(embryoblast)、体细胞( body cell）;3、目的基因 目的基因：基因工程研究开发的可满足人们特殊需要的基因产物。 （1）目的基因主要三种： 药物相关基因（胰岛素） 植物抗逆基因：抗虫、抗病、抗逆境，Bt gene 抗虫基因） 具有特殊营养价值的基因;（2）获得目的基因的方法: 构建和筛选基因组文库(Genome library) 构建和筛选cDNA文库(cDNA library) 人工合成：例如采用 PCR技术;4、工具酶 用于合成、切割、连接、修饰DNA片段的酶 。 种类 DNA聚合酶 DNA polymerase, 限制性内切酶 Restriction endonuclease, 连接酶 DNA ligase, 修饰酶 Modification enzyme,;(1) DNA 聚合酶：合成 DNA 片段 Such as : Taq DNA polymerase (2) 限制性核酸内切酶（Restriction Endonuclease） ： 基因工程中的关键酶， 可有规律的切割DNA片段 EcoR I 5’ATCGCGAT GAATTCGCGAT 3’ 3’ TAGCGCTACTTAAGCGCTA 5’ BamH I 5’ATCGCGAT GGATCCGCGAT 3’ 3’ TAGCGCTACCTAGGCGCTA 5’;(3) DNA连接酶 用于连接各种DNA片段，使不同基因重组. 例如：T4 DNA 连接酶;;5、基因工程新技术研究 (1) 转基因方法: 质粒转化 病毒转导 基因枪 电穿孔仪 种质介导法 (2) 检测方法 分子杂交 PCR 基因芯片技术;(3) DNA合成方法 PCR