第9章 遗传工程-201的3.ppt

第9章 遗传工程 §9.1 细胞工程(自学） §9.2 基因工程 §9.3 克隆技术 (了解); 遗传工程就是人类用近代科学技术的最新成就，在离体条件下进行遗传操作，按照既定目标，有计划地改变生物遗传性，甚至建造新物种的一门学科。 广义的遗传工程包括细胞工程、染色体工程、基因工程和在此基础上的克隆技术等几个方面的内容。 狭义的遗传工程则指在分子水平上进行遗传操作的基因工程。 ;植物细胞融合;（1）定义：按照预先设计的生物施工蓝图，采用分子生物学和现代生物技术，对基因进行操纵，以达到定向改变生物的目的。 （2）目的：将目的基因引入宿主细胞，并在宿主细胞中整合、表达和传代，从而创造出新型的生物，如新型微生物，转基因动物、植物等。 ;（3）作用： ○克服常规杂交育种的盲目性，大大缩短育种周期； ○打破物种亲缘关系的限制，有可能使生物的基因在人、动物、植物和微生物四大系统里进行广泛交流，创造出自然界原本没有的生物类型。 ;9.2.2 基因工程施工的程序 ●施工准备材料, 即“目的”基因，载体和工具酶等。 ●把目的基因与载体结合成重组DNA分子。 ●把重组DNA分子引入受体细胞，即基因转移，建立分子无性繁殖或称克隆。 ●鉴定筛选转基因系，即把目的基因能表达的受体细胞挑选出来。;关键元件与技术 ;载体的条件： ① 具有复制原点，能自我复制； ② 具多克隆位点，即有多种限制酶的酶切位点； ③ 具有可供筛选的遗传标记，如抗生素基因，鉴别有无载体的宿主细胞；显色表型，检测重组质粒存在与否； ④ 易从宿主细胞中回收。; 细菌质粒pBR322;Ti质粒（Tumour inducing plasmid）;Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile . Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.;●病毒载体：λ噬菌体（λ Phage）;Schematic representation of the full virus vector strategy and of some examples of the deconstructed virus strategy. CP, coat protein; GOI, gene of interest; MP, movement protein; P, promoter; Pol, RNA dependent RNA polymerase; RS, recombination site; T, terminator;Schematic description of infection and spread of replicons based on (a) first-generation and (b) second-generation viral vectors.;2）重组DNA分子的构建 ;● 构建重组DNA分子的方法： 天然粘性末端切口的限制性核酸内切酶分别处理目的基因DNA和载体DNA→粘性末端→碱基互补形成双链→连接酶弥合切口→重组DNA分子。;Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile . Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.;平切的限制性内切酶处理载体和目的基因→平口→端部人工建造粘性末端→两个DNA分子粘合→重组DNA分子。 平切的限制性内切酶处理载体和目的基因→平口→T4噬菌体的连接酶直接把平口连起来→重组DNA分子。;高油酸转化事件MON87705表达载体pMON95829;3）受体细胞 受体细胞是接受重组DNA分子，目的DNA在其中得以复制扩增、目的基因得以表达产生出正确的表达产物的细胞。 从理论上讲，任何原核生物和真核生物的细胞，植物和动物的细胞都可以作为受体细胞。 ; 大豆未成熟子叶转化（转化效率1.2%）;受体选择： ○ 受体细胞来源的生物类型要与所使用的载体相互适应，即要选择合适的载体——受体系统 。 ○ 受体细胞要易于培养，适应于大规模生产或易于再生成完整的生物个体。 ○ 有时由于特殊的要求而需要选用特定的受体。如某些蛋白药物需要翻译后糖基化修饰才具有功能，必需要以真核细胞为受体。;4）重组DNA分子转入受体 将目的基因的DNA分子连结到载体DNA分子上后，就可以通过它进入到宿主细胞中。 转化（transformatio