第一章 基因工程的坏涅本概念和原理.pptVIP

基因工程 原理方法及应用; 本课程讨论4个问题：;第一章 基因工程的基本概念;1、基因定义的发展;年 G.J.Mendel的豌豆杂交试验;摩尔根（1866—1945）;1953年，DNA双螺旋模型的诞生;;2、基因的现代定义 基因从化学上来说，指的是一段DNA或RNA顺序， 该顺序可以产生或影响某种表型（genotype，phenotype），可以由于突变生成等位基因变异体（体细胞父源和母源；正常和突变基因）；从遗传学上来说，基因代表一个遗传单位，一个功能单位，一个突变单位。;;1）第一个实现DNA重组的人－Berg 1972年，Berg用E.coRⅠ切割SV40DNA和λphageDNA，经过连接组成重组的DNA分子。Berg是第一个实现DNA重组的人 2）第一个取得基因工程成功的人－Cohen 1973年， Cohen Group将E.coli的tetr质粒psclol和nersrR6-3质粒体外限制酶切割，连接成一个新的质粒，转化E.coli，在含四环素和新霉素的平板上筛选出了terrNer,实现了细菌遗传性状的转移。这是基因工程史上的第一个克隆化并取得成功的例子，这一年被定为基因工程诞生的元年;1972年，美国斯坦福大学P.Berg等在PNAS上发表了题为∶“Biochemical method for inserting new genetic information into DNA of Simian Virus 40:circular SV40 DNA molecules cotaining lamda phage genes and the galactose operon of Escherichia coli. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 69:2904-2909, 1972”，标志着基因工程技术的诞生。;第一个重组体构建; 当获得二聚体SV40DNA后，Berg等就证明了环状DNA被内切酶切成线性DNA后能够重新环化，并且能够同另外的分子重组。 于是他们进行第二步的实验就是从λdvgal DNA中制备含有E.coli的半乳糖操纵子DNA，用上述同样的方法进行重组连接，并获得成功。; ;Boyer and Cohen;Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.;3）1976年 美国南旧金山由博耶和斯旺森建立世界上第一家遗传工程公司;4）1980年 开始建造第一家应用重组DNA技术 生产胰岛素的工厂;;（一）理论上的3大发现： 1）20世纪40年代，Avery发现了生物遗传物质的化学本质是DNA。 2）20世纪50年代，Watson-crick提出了DNA结构的双螺旋结构模型，搞清楚了生物遗传物质的分子机制。 3）20世纪60年代，确定了遗传信息的传递??式： DNA→RNA→Pr,破译了全部遗传密码，43。;（二） 技术上的3大发明： 1）“基因剪刀”－限制性内切酶的发明 （1）20世纪40－60年代，科学家们就为基因工程设计了美好的蓝图， 但是面对庞大的dsDNA束手无策，无从下手把它切成单个基因片断。 （2）当时的酶学知识已有相当的发展，但是没有一个已发现的酶能完成这样的使命。 （3） 1970年，Smith和Wilcox在流感嗜血杆菌（Haemophilus inffuenzae）分离纯化了HindⅡ，取得了突破，为基因工程奠定了最为重要的技术基础。;1970年，从流感嗜血杆菌中分离到一种限制性酶 ;2）载体(“交通工具车子”)－基因工程技术诞生的第二个技术准备 （1） 有了切割与缝合（ligase）基因DNA的工具，还得有一个车子将重组DNA送到宿主细胞中去。 （2）1946年起，Lederberg就研究细菌性因子（F因子），50-60年代相继发现了R因子（抗药因子），CoE(大肠杆菌因子)等质粒。 （3）然而，直到1973年Cohen才能将质粒作为基因工程载体使用（至今一直是基因工程最重要最广泛使用的载体）。这是基因工程的第二个技术准备。;3）逆转录酶－1970年Baltimove和Temin等同时各自发现了逆转录酶，打破了遗传学（生物学）中心法则，使真核基因的制备成为可能。（原因如下） （1）真核基因组庞大而复杂， 不易制得基因图谱。 （2）即使有了基因图谱，因为真核基因有内含子，不能在原核表达系统剪接出mRNA，没有成熟的mRNA就不能得到相应的产物。 （3）经过逆转mRNA→cDNA(complementory DNA)文库要比基因组文库