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临沂大学实验教学教案 所属学院 生命科学学院 课程名称 微生物学 课程类型（本科/高职） 本科 生物科学、生物技术 临沂大学生命科学学院微生物学课程组生命科学学院微生物学实验教学授课教案 授课对象 专业本科 教材名称 《微生物学实验教程》咸洪泉、郭立忠主编实验一 1.认识微生物实验所需要的各种器皿，了解常用工具和仪器的名称、用途。 2.掌握对玻璃器皿的清洗、包扎方法与干热灭菌的操作过程。 实验原理 1.微生物学实验要求较高的无菌状态，因此，实验所用的器皿，大多数要进行消毒、灭菌从而用以培养微生物，所以对其质量、规格、洗涤和包扎方法均有一定要求。 2.清洁的玻璃器皿是实验得到正确结果的先决条件，包扎方法要能保证防止污染杂菌 实验材料 1．培养皿2．去污粉、肥皂、清洗剂、毛刷。 3．棉花、扎绳、包扎纸。教学方法 讲授式+讨论式+启发式教学 内容及 时 间 安 排 内容时间 第1章绪论 1 （1）学习下列常用仪器的种类、规格和应用范围： ① 培养皿； ② 试管； ③ 三角瓶； ④ 烧杯； ⑤ 吸管； ⑥ 量筒。 （2）学习玻璃器皿的洗涤方法 （3）学习各种器皿的包扎 2. 干热灭菌操作 1．装入待灭菌物品 将包好的待灭菌物品（培养皿、吸管等）放入电烘箱内，关好箱门。 2．升温 接通电源，拨动开关，打开电烘箱排气孔，让温度逐渐上升。当温度升至100℃时，关闭排气孔。 3．恒温 当温度升达到160～170℃时，恒温调节器会自动控制调节温度，保持此温度2h。干热火菌过程，严防恒温调节的自动控制失灵而造成安全事故。 4．降温 切断电源、自然降温。 5．开箱取物 待电烘箱内温度降到70℃以下后，打开箱门，取出灭菌物品。 4学时 思考 2.简述玻璃器皿洗涤的基本要求。 3.简述干热灭菌的操作步骤。 生命科学学院微生物学实验教学授课教案 授课对象 专业本科 教材名称 《微生物学实验教程》咸洪泉、郭立忠主编 培养基的制备和灭菌 实验目的 1.了解培养基的配制原理和方法，掌握其配制过程。 2.学习并掌握高压蒸汽灭菌的原理和操作技术 。 实验原理 1. 由人工方法配制的适合微生物生长繁殖或积累代谢产物的营养基质称为培养基。主要用于微生物的分离、培养、鉴定、菌种保藏或积累代谢产物等方面。 2. 高压蒸汽灭菌是把待灭菌的物品放在一个可密闭的高压蒸汽灭菌锅中进行的，通过加热，产生大量蒸汽使其中压力升高，从而使沸点增高，得到高于100℃的温度。导致菌体蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。 实验材料 1.器材 试管、三角瓶、烧杯、量筒、玻璃棒、培养基、分装器、天平、牛角匙、高压蒸汽灭菌锅、pH度纸、棉花、牛皮纸、记号笔、麻绳、纱布、吸管、培养皿、电烘箱、注射器、微孔滤膜过滤器、镊子等。 2.试剂 牛肉膏、蛋白胨、NaCl、琼脂 教学方法 讲授式+讨论式+启发式教学 内容及 时 间 安 排 内容时间 1 (1)配方：NaCL 0.5％、蛋白胨 1％、牛肉膏 0.3％，琼脂1.5-2.0％， pH7.4-7.6 (使用10％ NaOH和 5％ HCL调节)。 (2)配制：称量及加热溶化----加琼脂----定容----调pH----分装、加塞、包扎。 (3)分装: 每组装3个三角瓶，150ml/瓶，包扎、灭菌。将剩余的250ml分装大试管（装量为试管长度的1/5），加棉球，包扎、灭菌。 2.察氏一号培养基的配制与分装 (1)配方：K2HPO4 0.1% MgSO4.7H2O 0.05% FeSO4 0.001% （加3滴即可） KCL 0.05% NaNO3 0.2% 葡萄糖 3% 琼脂2% 。 (2)配制：称量及溶化----加琼脂----定容----分装、加塞、包扎 (3)分装： 平均分装在两个三角瓶中，包扎、灭菌。 3. 高 压 蒸 汽 灭 菌 (1)灭菌器内加入一定量水，将包扎好的物品放入其中。 (2)接通电源，进行加热。 (3)排除高压锅内的冷空气，可将排气阀打开，待排出大气后关闭排气阀；（或关闭排气阀，待压力上升到0.5kg/cm2时再打开排气阀，待压力回复到0时再关闭排气阀。）