鲫鱼肌原纤维结合型丝氨酸蛋白酶内源性抑制剂的的分析研究.pdfVIP

鲫鱼肌原纤维结合型丝氨酸蛋白酶内源性抑制剂的研究 摘 要 鱼糜加工过程中发生的凝胶劣化现象是影响鱼糜品质的重要因素。与海水鱼相比，淡 水鱼鱼糜加工更容易产生凝胶劣化。目前研究表明，鱼肌肉中含有的肌原纤维结合型丝氨 酸蛋白酶(MBSP)降解肌原纤维蛋白是造成鱼糜凝胶劣化的主要原因。因此，寻找一种 天然有效的MBSP抑制剂来防止鱼糜的凝胶劣化，成为目前鱼糜加工技术的另一方向。近 年，从白姑鱼肌肉中分离出一种内源性的肌原纤维结合型丝氨酸蛋白酶抑制剂 serine 0Vlyofibril-bound proteinase 内源性抑制剂，并尝试初步解释二者之间的作用机理。 本试验通过缓冲液抽提、酸沉淀、离子交换色谱、亲和层析等方法从鲫鱼肌肉肌原纤 结果说明MBSP属于胰蛋白酶类的丝氨酸蛋白酶。 200凝胶过滤层析 本试验通过硫酸铵分级沉淀、Q．Sepharose离子交换层析、Superdex 得到纯化，回收率为8．0％，纯化倍数为468倍。通过凝胶过滤测定的分子量为120kDa， kDa，65 而在SDS中，则检测到2个不同的亚基(55kDa)，推测其为异源二聚体结 构。通过LC—MS／MS高效液相．串联质谱进行的肽指纹图谱鉴定结果显示，得到的肽段与 物时，GPI的‰：0．36 与40℃以下较稳定。鲫鱼GPI能特异抑制鲫鱼MBSP活性，而对其它类型的丝氨酸蛋白 其墨为0．075 ～种内源性的MBSP抑制剂可能对鱼体肌肉的新陈代谢起着重要的调节作用。GPI也可作 为添加剂应用于鱼糜制品生产，有效抑制由MBSP引起的肌原纤维蛋白分解。 关键词鲫鱼，肌原纤维结合型丝氨酸蛋白酶抑制剂，纯化，性质研究 ofa inhibitorto serine Studyendogenousmyofibril·bound ofcrucian proteinase carp(Carassiusauratus) Abstract offish thesurimi The删[D如一phenomenon(thermalgeldegradationjellyproducts)during isan forthe withmarine f．actof of fish，fresh productionimportant qualitysurimi．Compared waterfishsurimiwas to more evidenceofthe of gel degradationeasily．The degradation prone for bY serine the I．cason myofibrillarproteinmyofibril-boundproteinase(MBSP)Wasmajor foranatural MBSPbecomeanother search inhibitorto modor／phenomenon．Therefore，the directioninthestudiesofsuri