土拉菌的实验室检测及分析技术研究进展.pdfVIP

中国人兽共患病学报 684 Chinese ofZoonoses Journal 文章编号：1002—2694(2009)07—0684—05 土拉菌的实验室检测及分析技术研究进展* 朱晓宇，海荣 中图分类号：R378．6文献标识码：A 土拉弗朗西斯菌(Francisellatularensis)属弗(CHAB)、Modified 朗西斯菌属，能引起人或动物的土拉菌病(Tulare-is等培养基都可于土拉菌的分离培养，少数菌株还 mia)。患者可见发热、淋巴结肿大、肺炎等症状。 可用哥伦比亚血平板或胰酶大豆(Trypticasesoy) 土拉菌在世界各地分布广泛，自然疫源地主要分布 平板培养n‘‘3。在CHAB平板上，土拉菌菌落的直 在北半球。目前，至少有包括中国在内的18个国家 径大约2～4rflm，呈绿色或白色，光滑湿润H3。 曾经报导过人间病例。 从现场标本中分离土拉菌较为困难。过去从病 1911年，土拉菌在美国加利福尼亚被首次分畜尸体中分离土拉菌的成功率仅有30％。1。最近， Kiersten 离，并被命名为Bacteriumtularensis。此后多年， J 其分类学地位几经更改，并在最近的伯杰氏手册中 培养基进行土拉菌分离，其成功率可以达到90％。 被命名为Francisellatularensis。目前，弗朗西斯此外，用添加有抗生素的CHAB培养基(CHAA 菌属至少包括Francisellatularensis、Francisella 培养基)可以抑制杂菌生长，是从受污染标本，甚至 tularensis又 philomiragia两个种，而Francisella尿液标本，分离土拉菌的好方法。他们的经验还表 可分为tularensis、holarctica、novicida、mediasiati— 明，若将现场标本浸入Cary-Blair培养基中，运输至 ca等亚种u’。tularensis亚种又称为A型土拉菌， 实验室再进行分离，阳性率反而低于将标本直接低 holarctica也被称为B型土拉菌。 温冻存后再运输至实验室分离。其原因在于Cary— 土拉菌不但是广泛分布的人兽共患病，而且是 Blair培养基使标本中的假单胞菌、葡萄球菌、变形 被各国国防机构密切关注的生物战剂。近年来，对 菌等杂菌得以大量繁殖，从而与土拉菌形成竞争。 土拉菌的研究日益增加，而土拉菌的实验室检测及 1．2分子生物学检测 目前，PCR及巢式PCR仍 菌株特性分析技术也较上世纪有了飞速发展。本文 然是较常用的快速检测方法。除16SrRNA基因 将对近几年的研究进展及主要结论进行综述。 外，编码外膜蛋白的fopA基因、琥珀酸脱氢酶基因 1 实验室检测技术现状 1．1 病原学检测 对病原体的分离是确定土拉菌 都已经被用做检测土拉菌的靶位点(表1)“。63。在 病的最直接证据。然而，鉴于对营养要求苛刻，生长 中国的420只鼠类标本中检测fopA基因，其阳性 缓慢、菌体小、感染力强等原因，直到今日，对土拉菌 率为4．76％，其中来自吉林省的标本阳性率为 的分离仍然是难度较大的工作。土拉菌在37℃生 11．65％，新疆的标本为10．oo％，黑龙江为6．56％， 长缓慢，28℃更不适于生长，而与之相似的其他细 内蒙古为1．77％u3。通过序列比对也证实，所检测 菌，如鼠疫菌、F．philomiragia，都能在28℃较好生 到的阳性片段均属holarctic