EMT、PAGE、LC-MS%2fMS分析联合筛选肝癌血清中肿瘤转移相关因子.pdfVIP

————————————————————————————————二I|III I I I I I IIIII 111 1 1 11I Y1 1159 目录 I 97 ◆ 中文摘要……………………………………………………4 AB STRACT…．．．．．…．．．．．…．．．．…．．．……．．…．．．．．…．．．．．．…．．．．．．……．．．．．．．．．．．．…．6 —二LJI——】L一 月IJ 舌…………………………………………………………………………………………8 材料和方法………………………………………………9 结 果…………………………………………………………………15 。i?：；：l‘_：i；《：≥?…．……………………………………………．…………………………………．．30 兰宕 论……………………………………………………………………………………37 ● 参考文献……………………………………………。38 综j苤…………………………………………………………………40 附录…………………………………………………………………49 致谢…………………………………………………………………61 ● 复旦大学上海市肿瘤研究所3 EMT、PAGE、LC．MS／MS分析联合筛选 肝癌血清中肿瘤转移相关因子 中文摘要 近年来基于质谱技术的飞速发展，在肿瘤血清蛋白质组的研究中已经发现了 许多有潜在临床应用价值的肿瘤相关的血清学标志物，但由于缺乏对这些血清学 标志物的深入研究，对其功能更不十分了解，这在某种程度上限制了它们在临床 诊断、预后方面的应用。 为了解决血清中蛋白质鉴定与其功能学研究不同步的问题，本研究中，我们 将血清蛋白功能、蛋白质分离纯化和质谱分析进行了有机的结合，以减轻研究设 计方案的复杂度，提高研究效率。 基于多数肿瘤细胞在其播散、转移过程中会发生上皮一间质细胞转变(EMT) 这一特点，本实验首先观察了50对肝病患者(13对肝癌来源，37对肝硬化来源 患者门脉血清和相应外周血清)及5个健康志愿者血清样品对人肝癌细胞系 SMMC·7721在细胞部分表型(如形态学，动力学，细胞免疫组织化学等)方面 影响的差异。通过对不同来源的血清进行多层次的比较，发现肝癌门脉来源(尤 ● 其是肝癌伴门静脉癌栓)的血清样品较外周血来源和非肝癌患者来源的血清样品 能明显诱导SMMC．7721细胞发生EMT。 为了开展对肝癌血清中诱导EMT的相关因子进行研究，本研究首先对有明 显EMT诱导能力的血清用截留孔径分别为3．5kD和10 kD的透析卡进行透析， 结果显示血清在截留孔径为10 kD的透析卡透析后EMT诱导能力消失，而经截 留孔径为3．5kD的透析卡透析后EMT诱导能力仍然存在，根据透析卡是“根据 其蛋白分子量大小截