依诺的肝素的制备和纯化探究.docVIP

江西浩然生物医药有限公司 项目研发计划 项目名称： HR-08技术研究 负 责 人： 起止时间： 项目编号： HR-08-1503002 目 录 内 容 页码 一 背景资料……………………………………………………… 二 立项目的……………………………………………………… 三 研究内容……………………………………………………… 四 资金预算………………………………………………… 五 实验研究时间计划…………………………………… 背景资料 依诺肝素钠(enoxaparin sodium，1)属于低分子肝素?，主要特征为分子中有一个4一烯吡喃糖醛酸结构(图1)。本品抗血栓作用强、出血危险性小，是目前抗凝血、抗血栓形成的主要治疗药物之一，肝素通过酶或化学的方法部分降解就可以获得低分子肝素。低分子肝素因为分子量较小，不易被IV因子中和，抗凝血效果和纤溶作用得以增强，而抗血小板，影响血小板功能，影响血液的凝固性，诱发出血的作用大为减弱，加之生物利用度高达98%，量效关系明确，抗凝效果易于预防，血浆半衰期较普通肝素长2-3倍，同时具有快速和持续的抗血栓形成作用，改善血流动力学。 依诺肝素钠由法国AVentis 公司研发，并与1993年申请专利。但该专利未涉及生成过程中酯化率，成环率及生产纯化等关键工艺。采用该转利生成的样品无法达到欧洲药典4.0版规定的标准。本研究通过控制上述反应条件，得到适合于工业生成的依诺肝素钠工艺，所得的成品溶液颜色符合欧洲药典4.0版要求，其余质量指标均符合欧洲药典5.3版。 实验目的 建立HR－０８制备和纯化的工艺技术参数，进行工艺放大和工艺稳定性研究。 三、实验内容： 实验步骤： 3.1．成盐： 3.1.1 称取06样品（例如100g）用纯化水(1000ml)溶解到10%溶液，边加入边搅拌，至均匀；称取06样品质量2.5倍的苄索氯胺(250g)用纯化水(1250ml)溶解至20%溶液； 3.1.2将上述20%苄索氯胺溶液缓缓加入肝素钠溶液中，边加边搅拌，加完后继续搅拌0.5小时； 3.1.3将反应液离心收集沉淀（离心速率与时间根据离心机直径调整，一般来说离心上清越清越好，离心效果直接与回收率相关，一般选用沉降式离心机？； 3.1.4将沉淀捣碎（尽量捣碎）加入1.1中肝素钠质量10倍量的纯化水(1000ml)搅拌洗涤0.5小时，离心收集沉淀（离心速率与时间根据离心机直径调整，一般来说离心上清越清越好，离心效果直接与回收率相关。）； 3.1.5重复1.4操作； 3.1.6将沉淀60℃烘干，烘干至水分接近0.5%（用卤素水分测定仪110℃，6分钟），得到成盐物中间体。(300g左右)（回收率以起始06样品质量算，应该在300%（290%-310%）左右，烘干过程要注意翻盘，最终成颗粒（颗粒直径尽量小于1cm），烘干温度要控制好，一定不要超过?60℃?） 成酯： 3.2.1将成盐物中间体（300g）用5倍量的二氯甲烷（1500ml）溶解，边加入边搅拌，至均匀，溶解温度36℃； 3.2.2加入成盐物（300g）1倍量的氯化苄(300ml)，边搅拌边加入，完全加入后搅拌反应25小时，反应温度35-36℃； 3.2.3加入反应液体积2倍量(3600ml左右)的10%（m/v，即结晶乙酸钠质量与甲醇体积之比）乙酸钠甲醇溶液至反应液中，边加入边搅拌，完全加入后，将温度控制在25℃搅拌反应1个小时，离心收集沉淀（离心速率与时间根据离心机直径调整，一般来说离心上清越清越好，离心效果直接与回收率相关。）； 3.2.4加入反应液0.5倍量（900ml左右）的甲醇，边搅拌边加入，至完全加入后，搅拌洗涤沉淀1个小时，离心收集沉淀（离心速率与时间根据离心机直径调整，一般来说离心上清越清越好，离心效果直接与回收率相关。） 3.2.5重复2.4； 3.2.6将沉淀60℃真空烘干，烘干至干燥失重接近5%，得成酯物中间体。（120-150g左右）（?烘干过程中注意翻盘，便于控制干燥失重，成酯物收率（相对于成盐物）为40-50%） 降解，纯化： 3.3.1将成酯物（120-150g左右，下面的计算按照135g计算）用20倍量（m/v）纯化水（2700ml，根据成酯物质量调整）溶解，边加入边搅拌，溶解温度56℃，完全溶解加入原料肝素钠重量0.08倍量的氢氧化钠（8g）（可以先用少量纯化水溶解），边加入边搅