1，1-二苯基-2-2苦基肼基游离基法测定调脾护心方及其不同组分清.docVIP

1，1-二苯基-2-2苦基肼基游离基法测定调脾护心方及其不同组分清 　【摘要】 目的研究调脾护心方的清除自由基活性及其成分。方法分别采用乙醇或水加热提取调脾护心方成分，并用石油醚、氯仿、醋酸乙酯和正丁醇依次进行萃取，利用1，1-二苯基-2-2苦基肼基游离法（DPPH法）进行清除自由基活性实验，同时与合成抗氧化剂维生素C进行对照。结果各组分均有一定的清除自由基作用，且调脾护心方水提物的醋酸乙酯萃取部分具有最高的清除自由基活性。结论 调脾护心方中的多酚类成分是主要的抗氧化活性成分，值得进一步研究。 【关键词】 调脾护心方 清除自由基活性 1，1-二苯基-2-2苦基肼基 Abstract：ObjectiveTo investigate the free radical scavenging activities and principals of regulating spleen and nourishing heart formula.MethodsThe water-extracted and regulating spleen and nourishing heart formula were separated by the order of ligarine, chloroform, ethyl acetate, and n-butano1. The antioxidant activity of regulating spleen and nourishing heart formula and its fractions were investigated by 2,2-Diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH) assay. ResultsAmong them, the ethyl acetate fraction of water extract had the most potent antioxidative effect.ConclusionThe polyphenols from regulating spleen and nourishing heart formula are main antioxidative compounds and worthy of further research. Key words：Regulating spleen and nourishing heart formula； Free radical scavenging activity； DPPH 人体在利用氧的过程中，会因各种内源性或外源性因素而产生活性氧（Reactive Oxygen Species， ROS）及各种自由基如氮自由基（NO）。如果自由基产生过多或清除过少，过量的自由基就会攻击生物大分子，导致细胞结构和功能破坏。因此自由基是人类衰老和许多疾病如肿瘤、心脑血管病等的重要诱因。寻找能够有效清除自由基而无毒副作用的抗氧化剂，预防和减轻上述疾病的发生和发展，是研究的重要课题之一。调脾护心方（由生黄芪、三七、茯苓、橘红等药组成）近年来在广东省中医院心脏中心被广泛用于治疗冠脉搭桥围手术期患者，临床疗效十分显著，能降低术后再狭窄的发生率，显著提高患者的生活质量，值得进一步深入研究［1～12］。本实验利用1，1-二苯基-2-2-苦基肼基游离基法（2，2-Diphenyl-1-picrylhydrazyl， DPPH法）测定调脾护心方及其不同组分清除自由基的能力，为调脾护心方的临床疗效提供一定的理论依据。 1 器材与方法 1.1 仪器与试药DPPH、维生素C(Vit C)为美国SIGMA公司产品，其它试剂均为国产分析纯。UV2100型紫外-可见分光光度计［UNICO（上海）仪器有限公司］；瑞士梅特勒－托利多公司AE-200型万分之一电子分析天平。 1.2 药品与试剂中药饮片黄芪为豆科植物膜荚黄芪Astragalus membranaceus（Fisch.）Bge.的干燥根，茯苓为多孔菌科真菌茯苓Poria cocos (Schw.) Wolf 的干燥菌核，橘红为芸香科植物橘Citrus reticulata Blanco的干燥外层果皮，三七为五加科植物三七Panax notoginseng (Burk.) F. H. Chen 的干燥根。以上中药饮片均于统一购自广东康美，以上中药饮片经广东省中医院中药制剂学实验室丘小惠研究员鉴定符合《中国药典》2000版标准，样品凭证标本存于广东省中医院心脏中心中药标本室。 1.3 DPPH溶液的配制精确称取DPPH 19.7 mg，加少量无水乙醇溶解，用250 ml容量瓶，加入95%乙醇定容， 配制250 ml浓度为0.2 mmol/L的