Amicoumacin B对MG63细胞bmp2转录及蛋白表达作用探究.docVIP

Amicoumacin B对MG63细胞bmp2转录及蛋白表达作用探究 　 作者：杨兆勇 张志斐 贺小波 杨隽 孙薇 丁艳 司书毅 张月琴 【摘要】 目的 研究amicoumacin B(045195A)对骨形态形成蛋白因子II(BMP2)的作用。方法 采用RTPCR技术，考察amicoumacin B对人骨瘤细胞MG63的BMP2转录的影响；应用流式细胞分析技术研究amicoumacin B对MG63细胞BMP2的表达的影响。结果 Amicoumacin B可在mRNA和蛋白水平增强BMP2的转录及表达。结论 首次证明amicoumacin B有上调BMP2的作用。 【关键词】 诺卡菌； Amicoumacin B； BMP2； 转录； 表达 论文代写 ABSTRACT Objective To investigate the effect of amicoumacin B on bone morphogenetic protEin2 (BMP2). Methods The effect of amicoumacin B to bmp2 transcription and expression in MG63 cells were studied by means of RTPCR analysis and Flowcytometry respectively. Result Amicoumacin B can enhance the transcription and expression of BMP2 at the level of mRNA and protEIn. Conclusion The activity of amicoumacin B on BMP2 is proved for the first time. KEY WORDS Amicoumacin B; BMP2; Transcription; Expression 论文代写 骨质疏松症是由于破骨细胞(osteoclast)和成骨细胞(osteoblast)间功能协调失衡，使骨溶解超过骨形成所致。骨形态形成蛋白因子II(bone morphogenetic protein2，BMP2)在成骨细胞分化过程中起非常关键的作用，除了在骨再生和修复过程中促进成骨细胞的分化并抑制其凋亡外［1，2］，还能募集并诱导骨髓干细胞分化为成骨细胞及软骨细胞，通过钙盐沉积形成新骨；此外BMP2能促进成骨细胞标志基因OPN、Cbfa1、Col I alpha1、BSP、ALP和fabp4(脂肪酸偶联蛋白4)等的表达［3～5］，因此在很多研究中， BMP2被视为 治疗 骨质疏松的重要靶标。 毕业论文 Amicoumacin B是一个由短小芽孢杆菌(Bacillus brevis)产生的寡肽类抗生素［1］，曾报道对胃溃疡有一定的保护作用［2］。本研究在应用以bmp2基因启动子为靶点的新药筛选过程中发现 中国 医学 科学 院医药生物技术研究所分离得到的诺卡菌属045195菌株产生的活性成分045195A与amicoumacin B相同，因此本研究首次发现amicoumacin B具有上调BMP2表达的作用。本文报道在mRNA和蛋白水平上评价amicoumacin B活性的研究结果。 　 　1 仪器与试药 毕业论文 1.1 仪器 PTC200 DNA扩增仪，SIGMA3K18高速离心机(美国MJ公司)，REVCO 3000 CO2培养箱，DNA SUB CELLTM电泳槽，DYYIII6B稳压稳流电泳仪，CSIM紫外分析仪，Multi Imagetm Light Cabinet Filter Position凝胶成像系统，BD FACSCalibur流式细胞仪。 1.2 材料 Amicoumacin B由诺卡菌属菌株045195发酵液分离纯化制得，其结构经1H和13C核磁共振光谱确证，纯度高于98%；TRIZOL：Invitrogen公司；RTPCR试剂盒：Invitrogen公司；人骨肉瘤细胞MG63：中国医学科学院医药生物技术研究所保存；山羊抗人BMP2的单克隆抗体：Santa Cruz公司；FITC标记兔抗山羊二抗：北京中杉公司；其余试剂均为分析纯。 毕业论文 2 方法与结果 论文代写 2.1 细胞培养 人骨肉瘤细胞MG63为贴壁细胞，约48h传代一次。待细胞长满后，弃旧培养基，加适量0.25%胰蛋白酶和0.02% EDTA(1∶1)溶液，在室温下消化约3min，弃消化液，加入含10% FBS的高糖