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Notch1基因在人脑胶质瘤中表达及其意义 　 作者：易海波 石松生 杨卫忠 陈春美 【摘要】 　　目的 研究 Notch1在人脑胶质瘤中的表达，并对其表达与胶质瘤病理级别的关系进行研究，探讨Notch1对人脑胶质瘤发生、 发展 所起的作用，从而为胶质瘤的 治疗 提供一定的 理论 依据。 方法 应用 半定量RTPCR方法检测70例人脑胶质瘤标本和12例正常脑组织中的Notch1 mRNA的表达。结果 Notch1 mRNA在人脑胶质瘤和正常脑组织中均可表达，且在人脑胶质瘤中的表达显著高于正常脑组织（Plt;0.01）；人脑胶质瘤Ⅰ～ Ⅱ级组和Ⅲ～Ⅳ级组中Notch1 mRNA表达均显著高于正常脑组织（Plt;0.01），并且Notch1 mRNA在人脑胶质瘤Ⅲ～Ⅳ级组中的表达显著高于Ⅰ～ Ⅱ级组（Plt;0.01）。结论 Notch1 mRNA在人脑胶质瘤和正常脑组织中均表达，且在人脑胶质瘤中呈显著高表达，可能与人脑胶质瘤的发生、发展有关；Notch1的表达与人脑胶质瘤的病理分级相关。 论文代写 【关键词】 Notch1　胶质瘤　RTPCR 毕业论文 　　 The Expression and Significance of Notch1 Gene in Human Gliomas 毕业论文 Key words：Notch1;Glioma;RTPCR 论文代写 　 Notch信号通路是一个既简单又复杂的信号通路，且在多个物种中表达。Notch信号对于细胞的生长发育具有广泛的多样化的 影响 ，包括干细胞的维持；细胞分化、增殖和凋亡的决定。1991年，Notch1在人类T淋巴母细胞白血病中首先被鉴定出来，首次提示了Notch信号通路与肿瘤相关[1]。许多体外及动物实验中已证实，活化的Notch可使正常细胞向恶性转化。已有越来越多的证据表明异常的Notch信号与一些人类肿瘤的发生发展相关。 本实验从基因水平，检测Notch1在各级别人脑胶质瘤和正常脑组织的表达情况。 分析 其与胶质瘤病理级别的相关性，探讨Notch1在人脑胶质瘤中的作用机制。 1资料与方法 1.1资料来源 收集福建医科大学附属协和 医院 神经外科2004年1月～2005年9月手术切除的人脑胶质瘤新鲜标本70例，男39例，女31例，年龄2～92岁，平均40.3岁。按2000年WHO脑肿瘤分类标准：Ⅰ～Ⅱ级（低度恶性胶质瘤）34例，包括星形细胞瘤Ⅰ、Ⅱ级25例、室管膜下瘤1例、少突胶质细胞瘤4例、少突－星形细胞瘤4例；Ⅲ～Ⅳ级（高度恶性胶质瘤）36例，包括间变性星形细胞瘤15例、间变性少突胶质细胞瘤6例、间变性少突－星形细胞瘤6例、间变性少突胶质细胞瘤伴部分胶质母细胞瘤变2例、胶质母细胞瘤7例。通过内减压手术获得新鲜正常脑组织标本12例作为对照。 毕业论文 1.2 主要试剂 Trizol（Invitrogen公司），二步法RTPCR试剂盒（Promega公司），Taq DNA聚合酶（上海普洛麦格公司）。 Notch1引物序列为利用Primier 5.0软件自行设计。 论文代写 Notch1：上游引物序列：5CGT GCA GAG TGA GAC CGT GGA3’ 下游引物序列：5TGC GGT CTG TCT GGT TGT GCA3’ 扩增片断长度为599bp。 βactin：上游引物序列：5CGA GAA GAT GAC CCA GAT CA3’下游引物序列：5GAT CTT CAT GAG GTA GTC AG 3’ 扩增片断长度为234bp。 1.3 方法 1.3.1采用TRIzol法提取组织总RNA取少量组织总RNA，琼脂糖凝胶电泳测试RNA完整。 毕业论文 1.3.2按RTPCR kit（二步法）说明书进行cDNA的合成取1μg RNA至于PCR管，70℃孵育10 min后，稍离心放置冰上。加入MgCl2 4μl，10×Buffer 2μl，dNTP 2μl，RNasin 0.5μl，Oligo(dT)15引物 1μl，AMV反转录酶0.75μl，加ddH2O补足至20μl，将反应体系于42℃ 60min，95 ℃ 5min，4℃ 5min。 1.3.3PCR反应体系cDNA 2μl，dNTP 0.9μl，MgCl2 3.75μl，10×PCR buffer 4.9μl，上下游引物（20pmol/μl）各1.25μl，Taq DNA聚合酶0.25μl，加ddH20补至50μl，混匀，离心。反应条件：94℃预变性5min;变性94℃ 30s，退火5