VEGF在肺癌患者血清及病变组织中表达及其及疾病预后关系.docVIP

VEGF在肺癌患者血清及病变组织中表达及其及疾病预后关系 　 作者：张祎捷,李现东,陈娜,韩继昌 李四红 【摘要】 目的：研究肺癌患者病变组织及血清中血管内皮生长因子（VEGF)的表达及其与肺癌生物学特性之间的关系. 方法：酶联免疫吸附法(ELISA)及免疫组化（SP法）分别检测不同考察因素的肺癌患者和肺炎性瘤样病变患者血清中及肺癌患者癌组织、癌旁组织和肺炎性瘤样病变患者中病变组织中VEGF的表达. 结果：血清VEGF的表达肺癌患者为（330±65） ng/L，明显高于肺炎性瘤变患者的（143±35） ng/L (Plt;0.05)；癌组织、癌旁组织及肺炎性瘤样病变组织中VEGF的表达率为74.8%，46.3%和18.1%，癌组织中表达率明显高于其余两者 (Plt;0.05)；肺癌患者VEGF的表达与年龄、性别、吸烟史和不同临床分期差异均无统计学意义(Pgt;0.05)，而与癌组织类型、分化程度和淋巴结转移差异具有统计学意义(Plt;0.05). 结论：VEGF在肺癌组织及肺癌患者血清中异常表达，与肺癌患者病变组织的病理类型、分化程度和淋巴结转移呈明显相关性，与肺癌患者的预后有关，VEGF表达变化可能成为一些类型肺癌新的诊断标志及基因治疗的新靶点. 【关键词】 肺肿瘤；血清；血管内皮生长因子；预后 0引言 血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor, VEGF），是重要的血管生成正性调节因子，能特异性地促进细胞分裂、增殖及迁移，在肿瘤的发生、发展、侵袭过程中起着至关重要的作用，近年来的许多研究证实：VEGF与肺癌的新生血管和淋巴管的生长以及肿瘤的生物学行为密切相关. 我们通过免疫组化和酶联免疫吸附法比较不同临床特征的肺癌患者与非肿瘤性肺部病变患者的肺组织及血清中VEGF的不同表达，探讨肺癌患者肺组织及血清中VEGF的表达与患者年龄、性别、吸烟史以及肺癌组织类型、淋巴结转移、分化程度、临床分期等相关因素的关系，旨在揭示其与疾病预后和复发的相关性. 1对象和方法 1.1对象选择我院200501/200612经病理学检查证实肺癌患者的石蜡标本65（男40，女25）例，年龄36～75平均 (55±9)岁. （同时取患者外周静脉血）按1997年UICC修订标准进行TNM分期：Ⅰ期20例，Ⅱ期17例，Ⅲ期17例，Ⅳ期11例. 按病理形态学分为：鳞状细胞癌38例，腺细胞癌27例. 按分化程度分为：高、中分化31例，低分化及未分化癌34例. 所有患者术前均未接受过化疗或放疗治疗. 肺炎性病变组选取同期在我院手术切除并经病理确诊肺炎性假瘤及肺结核患者标本31（男19，女12）例，年龄40～72平均（54±7）岁. 作为对照组. 经构成比比较（χ2检验），肺癌组与肺炎性病变组患者的性别及年龄构成比均一致（Plt;0.05）. 兔抗人VEGF mAb即用型SP试剂盒（福州迈新公司）；血清检测ELISA试剂盒（美国G.B公司）. 1.2方法 1.2.1标本采集所有患者于治疗前空腹抽取静脉血2 mL（不含抗凝剂），静置后，取血清用于VEGF的检测. 1.2.2免疫组化染色将待检测标本统一切成4 μm厚石蜡切片，提取组织细胞，按试剂盒说明进行免疫组织化学（SP法）染色. 步骤如下：石蜡切片（载玻片经APES胶处理）60℃烤片4 h. 切片按常规脱蜡至水. 3 g/L过氧化氢去除内源性过氧化物酶，10 min，水洗. 40 g/L胃蛋白酶30℃~32℃消化10 min，水洗. 0.01 mmol/L柠檬酸缓冲液内加热至90℃后，计时10 min，室温下自然冷却. 0.05 mmol/L Tris缓冲液2 min×3次，滴加正常鼠血清20 min，滴加兔抗AR mAb（浓度为1∶50）4℃过夜；0.05 mmol/L Tris缓冲液2 min×3次，滴加生物素化羊抗鼠IgG（浓度为1∶200）室温下30 min；0.05 mmol/L Tris缓冲液2 min×3次，滴加Streptperoxidase（浓度为1∶200）室温下40 min，DAB显色，镜下控制. 苏木素复染细胞核、脱水、透明、封片并照相. 阳性染色为肿瘤细胞浆内出现棕色颗粒. 组织VEGF表达结果判定标准：染色强度：0=未染色，1=弱染色，2=中等染色，3=强染色. 细胞染色百分率：0为0%阳性细胞，1为lt;25%阳性细胞，2为25%～50%阳性细胞，3为gt;50%阳性细胞. 采用染色强度+细胞染色百分率为记分方法，标准：0分为(-)，1～2分为(+)，3～4分为()，5～6分为(). 表达程度的划分界限：(-), (+)为阴性表达，(), ()为阳性表达. 1.2.3ELISA检测按试剂盒步骤进行. 将抗人