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三化汤对脑缺血-再灌注老龄大鼠脑组织肿瘤坏死因子-α影响 　 作者：樊凯芳，唐迎雪，曹淑霞 【摘要】 目的观察三化汤对脑缺血-再灌注老龄大鼠脑组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量的影响。方法将大鼠随机分为正常对照组、模型组、三化汤组、西药对照组（尼莫地平）、中成药对照组（血栓心脉宁）。采用双侧颈总动脉结扎方法制备脑缺血模型，脑缺血1 h后，再灌注30 min。取每组大鼠右侧大脑半球的前2/3，再称取脑组织50～100 mg，制成脑匀浆，检测TNF-α含量。结果模型组比正常对照组TNF-α含量显著升高（P＜0.01）；用药各组比模型组TNF-α含量明显降低（P＜0.05）；其中三化汤组比尼莫地平TNF-α含量降低明显（P＜0.05），和血栓心脉宁组无明显差异（P＞0.05）。结论三化汤能明显降低脑缺血-再灌注老龄大鼠脑组织TNF-α的含量，对脑缺血-再灌注老龄大鼠脑组织损伤有较好的保护作用。 【关键词】 三化汤；脑缺血-再灌注；大鼠； 肿瘤坏死因子-α 20世纪50年代以来，中风病成为三大死因之一，防治中风病已成为广大医疗工作者面临的重要课题。脑缺血-再灌注后，脑内大量表达的肿瘤坏死因子-α(TNF-α)参与了脑缺血-再灌注脑损伤的过程，引起和加重了脑损伤。因此，降低脑组织内TNF-α的含量对防治中风具有重要意义。笔者秉前贤认识，认为气机升降逆乱是急性中风病病机的关键，气机升降逆乱，致使气血和津液运行失常，产生痰、瘀、风、火，阻于脉络，壅塞清窍或血溢脑脉之外，发为中风。本文以老龄大鼠为研究对象，选用具有调气作用的三化汤，观察了其对脑缺血-再灌注老龄大鼠脑组织TNF-α含量的影响，以期为中医药防治中风的应用及作用机制提供依据。 　　1 材料与仪器 　　1.1 动物25～28周龄清洁级Wistar大鼠55只，体质量400～500 g，雌雄各半。由上海斯来克实验动物有限责任公司提供，符合普通实验动物质量标准［合格证号：SCXK(沪)2003-0003］。 　　1.2 药物 　　1.2.1 中药材大黄、枳实、厚朴、羌活均购于山东中医药大学门诊部。经山东中医药大学中药鉴定教研室鉴定，分别为蓼科多年生草本植物掌叶大黄Rheum palmatum L.的根茎，芸香科植物酸橙Citrus aurantium L.的干燥幼果，木兰科植物厚朴Magnolia officinalis Rehd. et Wils.的干燥根皮，伞形科植物羌活Notopterygium incisum Ting ex H. T. Chang 的干燥根茎。 　　1.2.2 三化汤流浸膏制备枳实、厚朴、羌活各120 g，加2.5倍体积的水，浸泡1 h，提取挥发油10 h后，加入等份的大黄120 g煎煮20 min滤出。同法煎煮3遍，混合滤出液，浓缩至每毫升制剂相当于1 g生药，加入挥发油，灭菌，4℃冰箱保存备用。 　　1.2.3 中西对照药尼莫地平：山东新华制药股份有限公司生产，国药准字血栓心脉宁：吉林省辉南长龙生化药业股份有限公司生产，国药准字中成药和西药购于济南宏济堂药店。 　　1.3 仪器TN型托盘式扭力天平(上海第二天平仪器厂)；漩涡混匀器(江苏省宝应县水泗实验设备厂)；冰箱(ARCTIC)；低速自动平衡离心机(北京医用离心机厂)；721分光光度计(山东高密分析仪器厂)；智能放免γ测量仪(上海原子核研究所日环仪器一厂，SN-695B型)。 　　1.4 试剂0.3%戊巴比妥钠(上海化学试剂厂，分析纯，批号：051028)；0.9%生理盐水(济南永宁制药股份有限公司，批号：0021100)；TNF-α放免试剂盒，购于解放军总医院科技开发中心放免所。 　　　2 方法 　　2.1 分组将实验动物随机分为：正常对照组（Ⅰ组）；模型组（Ⅱ组）；三化汤方组（Ⅲ组）；尼莫地平组（Ⅳ组）；血栓心脉宁组（Ⅴ组）。 　　2.2 给药方法常规饲养1周后开始给药，药物剂量根据人鼠体表面积折算等效比率计量表［1］，按成人(体重70 kg)临床用量的10倍换算，正常对照组、模型组以生理盐水4 ml/kg灌胃；三化汤组以中药4 ml/kg灌胃；西药对照组以尼莫地平片剂6 mg/kg灌胃；中成药对照组以血栓心脉宁0.72 g/kg灌胃。以上各组均为1次/d，灌胃10 d。 　　2.3 模型建立与取材 　　2.3.1 建立模型参照改良的Pulsinelli法［2］，采用双侧颈总动脉结扎法，分离双侧颈总动脉，用无损伤性动脉夹夹闭1 h，造成前脑(颈总动脉的供血区)缺血模型；再灌30 min造成脑缺血-再灌注脑损伤模型。 　　2.3.2 取材取右侧大脑半球的前2/3，再称取其中50～200 mg，与0.9%生理盐水按1∶9比例制成10%脑匀浆，离心(3000～40