高中生物-专题1第二节-基因工程的基本操作程序课件2-新人教版选修3.pptVIP

1.2 基因工程的基本操作程序 广东省高中生物联赛选拔考试 时间：本周五（2月21日）晚上7:00 地点：生化楼502,403 名额分配：高二级55人，高一级25人 有意向参加比赛的同学到科代处报名，并按指定时间参加选拔考试 1、从基因文库中获取目的基因 基因文库：将含有某种生物不同基因的许多DNA片断，导入到受体菌的群体中，各个受体菌分别含有这种生物的不同基因，称为基因文库。 基因文库分为： 基因组文库：一种生物的所有基因 部分基因文库（cDNA文库）：一种生物的一部分基因 如何从基因文库中获取目的基因？p9 *已知目的基因的部分核苷酸序列 将部分核苷酸序列扩增，用同位素标记 将基因文库所有的菌落转移至硝酸纤维膜上 处理消化细菌的蛋白质，使DNA固定在膜上 进行杂交 找出呈现阳性信号的菌落 从菌落中提取目的基因 PCR（多聚酶链式反应） 原理：DNA复制 条件： （二）将目的基因导入动物细胞 ①方法：显微注射法 目的基因表达载体提纯 取卵（受精卵） 显微注射 受精卵 新性状动物 用口径为1μm的DNA注射器，将大量的目的基因片段注入到受精卵的核内，然后把经过注射的受精卵移植到另一只雌性动物的子宫内，使受精卵发育为转基因动物。 ②过程： * 四个基本步骤： 1、目的基因的获取 2、基因表达载体的构建 3、将目的基因导入受体细胞 4、目的基因的检测与鉴定 步骤一：目的基因的获取 苏云金芽孢杆菌的抗虫基因，还有植物的抗病（抗病毒、抗细菌）基因、种子贮藏蛋白的基因，以及人的胰岛素基因、干扰素基因等。 目的基因指的是什么基因？ 1、控制所需性状的基因 2、编码蛋白质的结构基因 补：原核细胞的基因结构 非编码区 非编码区 编码区 编码区上游 编码区下游 与RNA聚合酶结合位点 启动子 终止子 RNA聚合酶能够识别调控序列中的结合位点，并与其结合。 转录开始后，RNA聚合酶沿DNA分子移动，并以DNA分子的一条链为模板合成RNA。 转录完毕后，RNA链释放出来，紧接着RNA聚合酶也从DNA模板链上脱落下来。 补：真核细胞的基因结构 编码区 非编码区 非编码区 与RNA聚合酶 结合位点 内含子 外显子 能够编码蛋白质的序列叫做外显子 不能够编码蛋白质的序列叫做内含子 启动子 终止子 编码区上游 编码区下游 内含子： 外显子： 目的基因的获取方法： 1、从基因文库中获取目的基因 2、通过PCR扩增目的基因 3、人工合成法 步骤一：目的基因的获取 限制酶 基因组DNA 许多DNA片段 1)基因组文库 是指将某种生物体的全部基因组DNA用限制酶切割成一定长度范围的DNA片段，再与合适的载体在体外重组后，导入受体菌的群体中储存，这个群体就称为该生物基因组文库。 与运载体连接 导入 受菌体群体 其目的是分离有用的目的基因和保存某种生物的全部基因。 2)cDNA文库 cDNA(互补DNA)： 是用某种生物发育的某个时期的mRNA经体外反转录后形成的互补DNA片段，与载体连接后储存在一个受体菌群中，这个受体菌群就叫做这种生物的cDNA文库 某种生物某个时期的mRNA 反转录 与运载体连接 导入 受菌体群体 单链DNA DNA聚合酶 双链DNA 鸟枪法 供体细胞中的DNA 许多DNA片段 运载体 限制酶 与载体连接 载入 受体细胞 产生特定性状 导入 外源DNA扩增 目的基因 分离 (直接分离法) 直接分离基因 1）反转录法： 以目的基因转录成的信使RNA为模板，反转录成互补的单链DNA，然后在酶的作用下合成双链DNA，从而获得所需的基因。 目的基因的mRNA 单链DNA(cDNA) 双链DNA (即目的基因) 反转录 合成 间接合成基因 2）根据已知的氨基酸序列合成DNA法 ： 根据已知蛋白质的氨基酸序列，推测出相应的信使RNA序列，然后按照碱基互补配对原则，推测出它的结构基因的核苷酸序列，再通过化学方法，以单核苷酸为原料合成目的基因。 蛋白质的氨基酸序列 mRNA的核苷酸序列 结构基因的核苷酸序列 推测 推测 目的基因 化学合成 上述三种目的基因提取的方法有何优缺点？ 根据已知氨基酸合成DNA法 反转录法 鸟枪法 缺点 优点 操作简便广泛使用 工作量大，盲目，分离出来的有时并非一个基因 专一性强 操作过程麻烦，mRNA很不稳定，要求的技术条件较高 专一性强 仅限于合成核苷酸对较少的简单基因 2、利用PCR技术扩增目的基因 DNA复制的条件 必修二 P54 DNA母链：提供复制的模板 解旋酶：打开DNA双链 4种脱氧核苷酸：合成子链的原料 DNA