伤寒沙门菌鞭毛素基因fljB-z66克隆表达及其多克隆抗体制备.docVIP

伤寒沙门菌鞭毛素基因fljB:z66克隆表达及其多克隆抗体制备 　 作者：张海方 高宇琳 黄新祥 生秀梅 徐顺高 许化溪 【摘要】 目的： 克隆表达H:z66阳性伤寒沙门菌鞭毛素基因fljB:z66，并纯化制备相应的多克隆抗体。方法： 利用PCR 技术从H:z66阳性伤寒沙门菌基因组DNA中得到鞭毛素基因fljB:z66，将该基因克隆到表达载体pET28a(+)上并在大肠埃希菌JM109中进行表达;fljB:z66的表达产物经Ni柱纯化后作为抗原免疫兔以制备多克隆抗体。结果： 经PCR及序列分析证实，伤寒沙门菌鞭毛素基因fljB:z66 被成功导入表达载体pET28a(+)，并在大肠埃希菌JM109中获得了高效表达，以此作为抗原成功制备了兔抗z66的多克隆抗体。结论： 成功克隆表达了H:z66阳性伤寒沙门菌鞭毛素基因fljB:z66，并制备了相应的多克隆抗体，为今后深入研究H:z66阳性伤寒沙门菌的单向相变换机制奠定了基础。 【关键词】 伤寒沙门菌; fljB:z66; 多克隆抗体 　　[Abstract] Objective: To clone and express the flagellin gene fljB:z66 of H:z66 positive Salmonella enterica serover Typhi, and prepare the antiz66 polyclonal antibodies.Methods： Specific primers were designed to amplify the flagellin gene fljB:z66 from the chromosome DNA of H:z66 positive Salmonella enterica serover Typhi GIFU10007.The amplicon was inserted into the expression vector pET28a(+), which was then transferred to E.coli JM109 to be expressed.The recombinant protein FljBHis6 was purified with NiTED packed column and was used as immunogen to prepare the polyclonal antibody.Results： PCR and sequencing analysis demonstrated that the flagellin gene fljB:z66 of H:z66 positive Salmonella enterica serover Typhi was inserted into the vector pET28a(+) and was expressed highly in E.coli JM109.The rabbit antiz66 polyclonal antibody was prepared successfully.Conclusion： This study was a foundation to research the mechanism underlying the the unidirectional flagellar phase variation of H:z66 positive Salmonella enterica serover Typhi. 　　[Key words] Salmonella enterica serover Typhi; fljB:z66; polyclonal antibody 　　伤寒沙门菌(Salmonella enterica serovar Typhi)是沙门菌属中一种重要的人类肠道致病菌。鞭毛(flagella)是细菌的动力装置，也是沙门菌的一种重要毒性因子[1]。沙门菌鞭毛可分为基体、弯钩和细丝三部分。基体部被包埋在细菌内外膜中，有中央小管。细丝部在菌体外侧通过弯钩部和基体部相连，主要由一种称之为鞭毛素(flagellin)的蛋白质构成。大多数的鞭毛抗原血清型如鼠伤寒沙门菌(Salmonella enterica serovar Typhimurium)有两种不同的鞭毛素编码基因，位于染色体不同部位，称之为两相菌株(biphasic strain)，常以fliC和fljB表示其一、二相鞭毛素基因。 　　1981年Guinee等[2]在伤寒沙门菌中发现一种新的z66鞭毛抗原。2004年Huang等[3]发现伤寒沙门菌z66抗原的编码基因具