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假奓包叶抗菌活性部位提取工艺探究 　 作者：赵敏，张元媛，陈晟，张璐，王军宪 【摘要】 目的筛选假奓包叶抗菌活性部位的最佳分离工艺。方法以没食子酸为检测指标，采用HPLC测定没食子酸的含量，对假奓包叶的提取分离工艺进行研究。结果最佳工艺为：以水作为溶剂，采用温浸法提取，原料粉碎为中粉，液料比20∶1(g∶ml)，提取温度为50℃，提取时间8 h,提取1次。结论该提取分离方法提高了假奓包叶的利用率，且简便可行，提取物具有抗菌活性，可用于工业生产。 【关键词】 抗菌活性部位; 假奓包叶; 提取工艺 假奓包叶又名金沙叶、艾桐、老虎麻，原植物为大戟科假奓包叶属植物假奓包叶Discocleidion rufescens (Franch.) Pax et Hoffm.，主产于陕西、甘肃、湖北、湖南、川贵等地[1]。民间以根皮入药，具有清热解毒、泄水消积的功效，用于治疗水肿、食积、毒疮、鹅掌风等症[2]。在对其化学成分研究中发现，该植物中含有的结构类型包括黄酮类、有机酸类、三萜类和蒽醌类化合物等，其中，没食子酸的含量较高，且该化合物具有抗菌、杀锥虫、抗肿瘤、清除自由基和抗氧化等药理活性[3～6]。故本研究以没食子酸含量作为指标，对假奓包叶叶中的抗菌活性成分的提取工艺进行初步研究和探讨。 　　1 仪器与试药 　　LC-2010A型高效液相色谱仪(日本岛津公司);AE240S型电子分析天平(瑞士METTLER公司);HS6150D超声振荡仪(天津市恒奥科技发展有限责任公司);RE-52型旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂);HH-4型数显恒温水浴锅(国华电器有限公司);SHZ-D循环水真空泵(河南巩义市英峪予华仪器厂)。 　　假奓包叶采于陕西汉中地区，经西安交通大学医学院药学系天然药物化学研究室王军宪教授鉴定为大戟科植物假奓包叶Discocleidion rufescens (Franch.) Pax et Hoffm.的叶;没食子酸对照品(实验室自制，纯度gt;98%);高效液相用甲醇为色谱纯;蒸馏水自制;其余试剂均为分析纯。 　　2 方法与结果 　　2.1 含量测定 　　2.1.1 色谱条件色谱柱为Dikma Diamonsil C18柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)，流动相为甲醇-0.1%磷酸水溶液(5∶95)，检测波长为269 nm;流速为1.0 ml·min-1;柱温为25℃。 　　2.1.2 对照品储备液的制备 精密称取没食子酸对照品21.8 mg，置于50ml的容量瓶中，用甲醇配成浓度为0.436 mg·ml-1的对照品储备液，备用。 　　2.1.3 供试品溶液制备取干燥假奓包叶叶粗粉1 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入蒸馏水20 ml，50℃下温浸提取8 h，放冷，摇匀，滤过，精密吸取续滤液5 ml至蒸发皿中，蒸干，残渣用甲醇转移并定容至5 ml容量瓶内，摇匀，经0.45 μm微孔滤膜过滤，即得供试品溶液。 　　2.1.4 标准曲线及线性关系考察 精密吸取对照品储备液0.10，0.80，1.60，2.50，3.75，5.00ml，分别置10 ml量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀，分别精密吸取上述溶液各10 μl，注入高效液相色谱仪，测定峰面积，以没食子酸对照品浓度(mg·ml-1)为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，绘制标准曲线，回归方程为Y=3 × 107X + 508 65(r =0.999 6)，表明没食子酸的浓度在0.004～0.218 0 mg·ml-1与峰面积呈良好的线性关系。 　　2.1.5 精密度实验 精密吸取上述“2.1.4”项浓度为0.109 0 mg·ml-1的对照品溶液，重复进样5次，10 μl/次，平均峰面积为386 573，RSD为0.44%，说明仪器精密度良好。 　　2.1.6 重复性实验 取同批号的假奓包叶叶样品5份，依法制备供试品溶液，按拟定的色谱条件进行测定，并按外标法计算，结果测定没食子酸的平均含量为0.427%，RSD为2.17%。 　　2.1.7 稳定性实验 取没食子酸对照品溶液，分别在0，2，4，6，8，12，24 h进样1次，依法测定，平均峰面积为3 105 072，RSD为0.60%，说明没食子酸稳定性较好。 　　2.1.8 加样回收率实验 精密称取假奓包叶叶粗粉1 g(相当于没食子酸约0.2 mg)，准确加入0.2 mg没食子酸对照品，按“2.1.3”项下方法制备供试品5份，分别进样10μl，测定峰面积，计算加样回收率。结果平均回收率为100.6%，RSD为1.68% 。 　　2.2 提取工艺首先对提取溶剂和提取方法进行了筛选，并在此基础上采用正交法对提取工艺进行优选。选取5个对提取率影响较大的因素(粉碎度、液料比、温度、时间和次数)、每个因素选择3个水平进行考察，按L1