加味四君子汤对小鼠肠道免疫功能调整作用探究.docVIP

加味四君子汤对小鼠肠道免疫功能调整作用探究 　【摘要】 　　目的观察加味四君子汤和思密达对小鼠肠道免疫功能的调整作用。方法盐酸林可霉素灌胃建立小鼠肠道菌群失调及免疫功能紊乱模型。昆明种鼠随机分6组，正常对照组、自然恢复组、造模组、思密达组、加味四君子汤组和两药合用组，分别进行肠道菌群检测、小肠黏液中sIgA的测定、血清中IL-2的测定及肠通透性(尿液中乳果糖与甘露醇比值)的检测。结果盐酸林可霉素灌胃3 d小鼠，肠道菌群失调，sIgA从正常对照组的14.54 mg/ml增加到18.70 mg/ml，IL-2从正常对照组的1 186.65 mg/ml降低到1 111.58 mg/ml、L/M从正常对照组的1.27增加到1.37 mg/ml。实验组分别给加味四君子汤、思密达及两药合用后，肠道菌群得以调整，sIgA含量从18.70 mg/ml降低到14.52 mg/ml，IL-2的含量从1 111.58 mg/ml增加到1189.58 mg/ml，肠黏膜通透性减小。各治疗组间比较，加味四君子汤和思密达合用组优于加味四君子汤组和思密达组。结论加味四君子汤和思密达均能修复受损黏膜，有调节肠道免疫功能的作用，但加味四君子汤在调整失调的菌群方面优于思密达，两药合用给药则能起到最佳效果。 【关键词】 肠道菌群； 加味四君子汤； 肠道免疫； 肠通透性 正常肠道屏障功能依赖于肠黏膜上皮屏障、肠道免疫系统以及肠道的正常微生物的平衡［1］。近年来，很多学者开始研究四君子汤对肠道菌群的调整作用，鞠宝玲、李俭等［2，3］研究表明四君子汤可以改善脾虚大鼠胃肠黏膜的异常形态，使其恢复正常，并对双歧杆菌和乳酸杆菌有明显的增菌作用，从而调节肠道菌群失调，治疗由肠道菌群失调导致的一系列疾病 ，李莉等［4］研究了加味四君子汤对肠道菌群失调小鼠的调整作用，效果显著。本文探讨山药加入四君子汤对肠道菌群的调整及机体免疫功能的调整作用。 　　1 材料与仪器 　　1.1 动物清洁级昆明种小鼠（合格证号：SCXK 2005-0001），体质量18～22 g，雌雄各半，由河南省实验动物中心提供。 　　1.2 药物与试剂盐酸林可霉素（300 g/L）, 上海旭东海普药业有限公司，批号：070509；思密达，博福-益普生制药有限公司，批号：S0293；中药：人参、山药、白术、茯苓、甘草，购于张仲景大药房，将上述中药按2∶2∶2∶2∶1混合，水提取，过滤浓缩至1 g/ml生药量；生理盐水，山东鲁抗辰欣药业有限公司；乳果糖（辽宁省丹东市康复制药厂）；甘露醇（北京化工厂，进口分装）；甲基甘露糖苷（SIGMA）；吡啶（FLUKA）；羟基盐酸盐（SIGMA）；n-三甲基硅烷咪唑（SIGMA） 　　1.3 培养基EMB（伊红美兰培养基），用于肠杆菌的分离培养；EC（肠球菌选择性培养基）；LBS（乳酸杆菌选择性培养基）；BD（类杆菌选择性培养基）；Blb（双歧杆菌选择性培养基），培养基的配制参考文献［5］。 　　1.4 仪器设备酶标仪(BIO-RAD Model 680)；气相色谱（FULI GC 9790II）配有FID检测器，微机色谱数据处理系统SE-54，15 m×0.53 m×0.5 μm毛细管柱。色谱分析条件：SE-54，15cm×0.53 m毛细管柱。初温150℃，程序升温I终温220℃，速率10℃/min,程序升温II终温280℃，速率15℃/min，保持6 min,注样器的温度220℃，检测温度300℃。载气（高纯氮）30 ml/min,燃气（氢气）30 ml/min，助燃空气300 ml/min。 　　2 方法 　　2.1 动物分组、造模［3］及给药方法昆明种小鼠72只，体质量18～22 g，雌雄各半。随机取出12只作为正常对照组，其余用盐酸林可霉素（300 mg/ml）灌胃，每次0.3 ml，2次/d，连续3 d，正常对照组灌等量生理盐水。随机取出12只作为模型组，立即处死，进行各种指标检测。然后将剩余的48只随机分为4组，分别灌以生理盐水、思密达、加味四君子汤、及两药合用。中药组和生理盐水组，0.3 ml/次，2次/d，连续6 d；思密达组（0.06 g/ml）， 0.2 ml/次，2次/d，连续10 d。各治疗组及正常对照组给药完成后处死小鼠，采集标本进行各种指标检测。 　　2.2 肠道菌群检测无菌采取小鼠鲜粪便约0.2 g置于灭菌后带玻璃珠的青霉素小瓶，加灭菌生理盐水制成10倍的稀释度，振荡使之均质化，递10倍稀释至10-6，取25 μl分别接种在各类选择性培养基上，培养EMB培养基及EC培养基 放入需氧环境35℃培养16～24 h后计数，BLb培养基、LBS培养基和BD培养基放入厌氧环境35℃培养48～72 h之后计数［6］。根据菌落形态，涂片分析及耐氧实验结果计算各