参龙煎剂对肺纤维化肺组织形态学影响实验探究.docVIP

参龙煎剂对肺纤维化肺组织形态学影响实验探究 　【摘要】 　　目的：观察参龙煎剂对博来霉素致大鼠肺纤维化的防治作用。 方法 ：将大鼠按照性别、体重随机分为空白组、模型组、泼尼松组（5.4mg/kg）、参龙煎剂低剂量组（生药量0.675g/ml）、参龙煎剂中剂量组（生药量1.2g/ml）、参龙煎剂高剂量组（生药量2.4g/ml）。按照BLM5mg·kg－1体重复制大鼠肺纤维化模型。24小时后给药，观察各实验组7天、14天、28天肺组织病理形态表达情况的变化。结果：参龙煎剂 治疗 后模型大鼠肺部炎症浸润情况减轻、肺泡破损减轻、胶原沉积减少。结论：结果表明，证实了参龙煎剂能够改善肺纤维化的异常组织结构，使延缓肺纤维化的病程成为了可能。 论文代写 【关键词】 肺纤维化 HE染色 Masson染色 　　肺纤维化是一组病因各异、表现相似的疾病谱，其病理主要表现为早期的炎症细胞浸润、肺组织损伤，晚期的细胞外基质及胶原沉积和肺组织结构的重塑[1]。许多 研究 表明，肺纤维化初期肺组织病 理学 改变以肺炎症浸润为主，大量的炎症细胞浸润，肺组织充血、肿胀，后期则以胶原纤维增生为主，大量胶原纤维代替正常组织，使肺组织破坏、功能丧失[2～3]。 　　本实验旨在观察参龙煎剂即通过补肺益肾、祛瘀通络法对肺纤维化作用机制进行探讨。通过对各组大鼠的一般状态、病理形态的比较来说明参龙煎剂对博莱霉素引起的机体系统脏器损伤和一般功能状态的损害有一定的保护作用。 　　1 资料 　　1.1 实验动物 毕业论文 　　健康Wistar大鼠216只：雌雄各半，体重180～210g，由沈阳医学院动物实验中心提供（动物许可证号：SCXK（辽）2003-0016），按清洁级标准饲养。 　　1.2 实验药品 毕业论文 　　盐酸平阳霉素（BLM）：哈尔滨博莱制药有限公司生产，国药准字：批8mg/支。参龙煎剂：辽宁中医药大学附属二院制剂室制备，主要成分由黄芪、沙参、当归、川芎、熟地、地龙、甘草等中药组成。醋酸泼尼松片：国药准字产品批号051108。5mg/片，天津天药药业股份有限公司。 　　1.3 主要试剂及仪器 毕业论文 　　万能显微镜（日本 OLYMPUS 公司）BI-2000图像 分析 系统（成都泰盟 科技 有限公司）；HE染色、Masson染色试剂（ 中国 医药上海化学试剂公司）。 　　2 实验方法 　　2.1 动物模型制备 　　参照Szapiel[4]方法，将大鼠麻醉，暴露气管，一次性注入BLM注射液（5mg·kg－1），左右旋转鼠板，使BLM注射液均匀分布于两肺，制成模型。 毕业论文 　　2.2 实验动物分组及给药方法 　　实验动物按雌雄、体重分层随机分为6组，每组36只，每天灌胃一次，每周复查体重，调整给药量。共饲养4周，分别于7天、14天、28天3个时间点取材，每次处死12只动物。分组：正常对照组、模型组、泼尼松组（5.4mg/kg）、参龙煎剂低剂量组（生药量0.675g/ml）、参龙煎剂中剂量组（生药量1.2g/ml）、参龙煎剂高剂量组（生药量2.4g/ml）。正常组、模型组建模后第2日起每日予以1ml/kg生理盐水灌胃。其余各组按配好的药品以等容药品灌胃。 　　2.3 标本的制备 　　腹主动脉放血至死，剖开胸腔和颈部，分离气管和肺脏，取下肺叶，用冰盐水洗去血渣，剔除结缔组织，滤纸吸干。称重后，同时结扎右主支气管，从肺门部离断，右肺上叶用定量输液泵小心灌入含有1/1000DFFC4%多聚甲醛溶液在25cmH20压力下进行灌注固定，切成1.5×1.5×1cm3大小，30分钟后投入多聚甲醛溶液固定一周。取固定好的组织，在横颈最大处3mm后组织片，常规脱水，二甲苯透明，用自动石蜡包理机。切面4um的切片。备做HE、MASSON染色、光学显微镜下观察。 毕业论文 　　2.4 病理形态学定量分析 　　用BI-2000图像分析系统对HE染色病理切片进行光密度（OD值）测定。扫描时将切片分为3个区域：肺泡腔内无组织结构，OD值最低，定为无染区，其面积代表肺泡腔的面积；细胞核的OD值最高，定为深染区，其面积反映炎症细胞浸润程度；细胞外基质和炎症渗出染色较细胞核浅，HE切片中为粉色或浅粉，定为浅染区，与肺泡炎阶段炎性水肿和渗出的区域基本一致，在模型晚期其面积主要反映细胞外基质沉积程度。将切片置于图像扫描分析仪显微镜下，在放大200倍条件下，每张切片分别从四周和中间随机选5个视野，测定深染区、浅染区和无染区所占的面积。 　　2.5 利用HE染色的病理切片，确定肺泡炎等级判定方法 病变程度确定根据Szapiel等