医学分子遗传学：第八讲 重组DNA技术与基因定位.pdfVIP

维普资讯 遗传 HEREDITAS(geljio~)12(2)：46一柚 1990 医 学 分 子 遗 传 学 第八讲 重组 DNA 技术与基 因定位 薛 京 伦 俞 民封 (复旦太学遗传学研究所 ，上海) 人体基因组是一个十分复杂的结构，每单譬体基 国仓鼠 DNA 顺序杂交。 用这一方法进行基因定位 因组大约有 3x10’bp组成，分成 22条常染龟体和 1 时，首先是选择台适的限制性内切酶，将人一 杂种细 条性染色体。 据估计 ，在凡体基因组上存在着 大 约 胞内的基因组顺序切割成不同大小的片段。壹于绝大 50，000一100，000牛结构基因，平均每分摩 (M)染色 多数动物基因的 DNA 顺亭都具有不同程度的保 守 体上分布着 2O个结构基 因。人体基因 组 大 约 育 33 性，因此必须设法将人和鼠的 DNA区分开米。一般 cM，由此推算出人体基因组上台有约66，000个结拇基 都是选择～种特定的限制性内切酶，用这一酶切割后 因。 现在 已经明确地錾定 了 1，600多个^体基 因， 的人体细抱 DNA 和小 鼠或 中国仓 鼠细胞 DNA再与 其中约有 1，000多个基因定位在特定的染色体上。基 特定的克隆基因 cDNA操针杂交，它们各昌 产生的 因定位是研究遗传性疾病和肿瘤发稍机制及进行基因 酶坷带型太小是不同的。用同一酶切割隶种细胞 DNA 诊断的基础。因此，基因定位研究的迅速发展，对于揭 I匾序，与克隆基因探针进行杂交，凡出现杂交带型的杂 示遗传瘸和肿瘤发病机制的本质，对于预防和瀚疗遗 种细胞，表明不皿台有鼠的基因顺序，而且含商A‘的基 传性疾病和肿瘤都将起到重要的促进和推动作用。 因颂序，即证明在 这一杂种细胞内，必然存在带有该基 用体细胞遗传学投术进行基因定位的方法都需要 因的特定人体染色体。相反，凡不出现人雌基因杂交 通过检测细胞内的基因产物，但有相当多的基因，如调 带型的杂种细胞，即表明不含有带有这一基因的特定 节基因 某些疾病型因等并没有发现基因产物。另外 ， 染色体。 在应用杂种细胞进行基因定位时 ，一般采用的^体亲 如需要定位人体清蛋白基因，需应用人体清蛋白 本细胞都是成纤维细胞或淋巴细胞，但是有许 多基因 基因 eDNA 作为探针 ，先分别与经 HindIll酶切后 在这两种细胞中并不能表达。 由于这些因素的影响， 的人体细咆和 CHO 细胞-(均为杂种细胞的亲本)杂 许多人体基因在单纯应用体细胞遗传学技术的条件下 交。杂交后的人体细胞 DNA 显示 6．8kb带型。CHO 不能得到定位。 细胞 DNA 则显示 3．kb带型。 在含有人体 斗号染 随着重组 DNA技术的建立和发展，克隆了许多 色体的^一CNO 杂种细胞中，6．8kb和 3．5kb带型都 人体基因，并且基因的结构和功能得到详娅研究，发现 出现 ，这一采种细R包即称为阳性杂种细胞(+)，而不含 了一大批存在于^体基因组上的 DNA 随机片段和限 有^体4号染色体的杂种细胞中， 只显示 3．5kb 带 制性多态位点。由于这些研究成果的弓人『，使基因定位 型，即为阴性亲种细J包(一)。相似的结果也可见于甩 研究不再依赖于培养细胞内基因产物的检测，而只需 EcoRf酶留后的结果。由于r^维清蛋白基因 eDNA探 要通过分子杂交方法 直接在染色体 DNA 水平上进行 针的特异性 HifldIll或 E~oRI杂交带只出现在含有 定位。但是 ，必须强调的是 ，应甩重组 DNA 技术进行 人体 4号染色体的杂种细胞，所以将这一基因定垃在 基因定位仍然需要以体细胞遗传学技术怍为基础。因 人