抑癌基因PTEN在上皮性卵巢癌中表达及其及uPA、MMP.doc

抑癌基因PTEN在上皮性卵巢癌中表达及其及uPA、MMP 　 作者：徐京晶　朱润庆　李铭　赵恒敏 【关键词】 卵巢癌；免疫组织化学；原位分子杂交； 　　摘要：为探讨抑癌基因PTEN表达在卵巢癌发生和演进中的作用及其与uPA、MMP2的相互关系，对8例正常上皮来源的卵巢组织、18例卵巢交界性肿瘤、60例上皮性卵巢癌石蜡切片组织，应用免疫组织化学SP法检测PTEN蛋白、MMP2蛋白的表达，分子原位杂交法检测uPA蛋白的表达。结果显示，PTEN在正常卵巢、卵巢交界性肿瘤、上皮性卵巢癌中的阳性表达率分别为87.50%（7/8）、50.00%（9/18）、23.33%（14/60），PTEN的阳性表达率在上皮性卵巢癌中低于正常卵巢、卵巢交界性肿瘤，差异有统计学意义(Plt;0.01, Plt;0.05)；I/II期阳性表达率37.50%明显高于III/IV期的13.89%（Plt;0.05）；卵巢内膜样癌PTEN阳性表达率7.14%，显著低于浆液样34.78%或黏液样囊腺癌44.44%（Plt;0.05）。PTEN表达与uPA表达呈负相关（Plt;0.05），与MMP2表达呈负相关（Plt;0.01）。 关键词：卵巢癌；免疫组织化学；原位分子杂交； 　　PTEN肿瘤的发生与多种癌基因及抑癌基因的异常激活、表达有关，肿瘤的侵袭和转移是一多步骤、多因素参与的极其复杂的过程，涉及肿瘤细胞的黏附、分离、迁移，基底膜及细胞外基质的降解，肿瘤新生血管生成的诸多方面。PTEN是迄今为止发现的第一个具有磷酸酶活性的抑癌基因，在生长因子的细胞信号传递中起着复杂而重要的作用，通过抑制细胞有丝分裂、诱导细胞凋亡、参与调节细胞的黏附、转移和分化等发挥抑癌基因的作用。尿激酶型纤维蛋白激活系统（uPA）通过水解纤溶酶原转变为纤溶酶降解细胞外基质进而使肿瘤不断浸润和扩散。金属基质蛋白酶(MMPs)是降解细胞外基质组分时最重要的一大分子蛋白。我们应用免疫组化、分子原位杂交技术检测正常卵巢、卵巢交界性肿瘤和上皮性卵巢癌中PTEN、uPA、MMPs的表达，探讨其在卵巢癌发生及演进中的作用及其在卵巢癌预后评估中的意义。 1材料和方法 11标本来源 研究标本86例取自武汉市第八医院1999年~2005年病理存档的石蜡标本，所有手术患者术前均未接受过放疗、化疗或激素治疗，诊断均经常规病理切片证实。患者年龄32~65岁，中位年龄48岁。正常上皮来源的卵巢组织8例，卵巢交界性肿瘤18例，上皮性卵巢癌60例（其中浆液性囊腺癌23例，黏液性囊腺癌9例，卵巢内膜样癌28例；高~中分化卵巢癌25例，中~低分化卵巢癌35例；按FIGO分级，I/II期24例，III/IV期36例；卵巢癌伴淋巴结转移15例，无淋巴结转移45例）。 12实验试剂 鼠抗人PTEN单克隆抗体、尿激酶型纤溶酶型活化因子即用型原位杂交试剂盒、鼠抗人MMP2单克隆抗体、SP试剂盒、DAB显色试剂盒均购自福州迈新生物技术开发公司。 13方法 石蜡块标本制成4μm厚的切片，免疫组织化学染色程序按SP试剂盒说明进行，PBS代替一抗作阴性对照，已知乳腺癌阳性片作阳性对照。PTEN阳性表达为淡黄色至棕褐色物质，定位于细胞浆，高倍镜下每张切片选5个视野，每个视野记数100个细胞。(-)：lt;25% ; (+)：gt;25%。MMP2以细胞出现棕黄色颗粒为阳性判定标准，MMP2表达的判定以染色强度和阳性细胞百分率的得分之积进行评估。（-）：0；（+）：1~3；（++）：4~6；（+++）：7~9。分子原位杂交按试剂盒说明，以未加入探针的预杂交液代替探针作为空白对照，已知乳腺癌阳性片作阳性对照。每张切片在高倍镜下随机选取10个视野，计算各实验阳性细胞的平均百分数，阳性染色均为细胞质着色呈棕黄色颗粒。根据着色范围划分，（-）：无阳性染色细胞或着色率lt;5%；（+）：阳性细胞数5%~25%；（++）：阳性细胞数25%~50%；（+++）：阳性细胞数gt;50%。 14统计学处理 所有数据采用CS2000软件包分析，根据适用条件以Pearson未校正法或Yates校正法计算χ2值, 或直接用确切概率法计算P值。PTEN、uPA与MMP2的表达关系采用配对四格表的相关分析Yates校正法。 2结果 21PTEN在正常卵巢、卵巢交界性肿瘤、上皮性卵巢癌中的表达 PTEN在正常卵巢、卵巢交界性肿瘤、上皮性卵巢癌中的阳性表达率分别为 87.50%（7/8）、50.00%（9/18）、23.33%（14/60），PTEN的阳性表达率在上皮性卵巢癌中低于正常卵巢、卵巢交界性肿瘤，差异有统计学意义(Plt;0.01, Plt;0.05)。 22PTEN表达与卵巢癌临床病理分期的关系 PTEN表达与卵巢癌的临床病理分期呈负相关