新肾上腺脑白质营养不良基因突变1例鉴定.doc

新肾上腺脑白质营养不良基因突变1例鉴定 　 作者：兰风华　杨渤生　卢爱薇　黄梁浒　朱忠勇 【关键词】 肾上腺白质营养不良 　　Identification of a novel mutation in the ALD gene of a Chinese patient with adrenoleukodystrophy 　　【Abstract】 AIM: To identify the mutational genotype in a Chinese family with adrenoleukodystrophy (ALD). METHODS: Total RNA was isolated from the peripheral blood of the patient and ALD mRNA was amplified by long RTPCR. The PCR products were subjected to direct sequencing with ABIs BigDye kit on type 377 sequencer. A 330 bp fragment spanning the mutation was amplified from the genomic DNA of the patient and his family members and digested with the restriction enzyme BspLI. RESULTS: C was changed to T at base 1523, replacing the proline at codon 508 with leucine. The mutation was inherited from his mother, which was heterozygous for the mutation. His father and sister were free from this mutation. CONCLUSION: A novel mutation, the P508L mutation, is found in the ALD gene of a Chinese patient with ALD. 　　【Keywords】 adrenoleukodystrophy; ALD gene; mutation, missense; ALD protein 　　【摘要】 目的： 对1例肾上腺脑白质营养不良（ALD）患者及其家系成员的ALD基因的突变类型进行鉴定. 方法： 以外周血RNA为模板，采用长链RTPCR技术，分4个片段扩增ALD基因mRNA的编码序列，对4个PCR产物进行直接测序，筛查整个基因编码区. 通过限制性内切酶酶切分析患者及其家系成员基因组ALD基因片段，以进一步确证所发现的基因突变. 结果： 位于患者ALD基因第6外显子的第508位密码子存在一个新的错义突变CCC→CTC (P508L)，患者母亲为突变携带者，患者父亲和妹妹不存在此突变. 结论： 发现中国ALD患者一个新的ALD基因突变，即P508L突变. 　　【关键词】 肾上腺白质营养不良；ALD基因；突变，误义；ALD蛋白 　　0引言 　　肾上腺脑白质营养不良(ALD, adrenoleukodystrophy)是最常见的一种遗传性中枢神经髓鞘合成病变［1］. 致病基因（ALD基因）位于X染色体，编码一个有745个氨基酸残基的过氧化物酶体膜蛋白，即ALD蛋白（ALD protein, ALDP）. 我们对1例肾上腺脑白质营养不良患儿及其家庭成员的ALD基因突变进行了分析. 　　1对象和方法 　　1．1对象男，7岁，汉族，福建省周宁县人，因进行性视力下降、步态不稳1 a余入院. 检查：神志清楚，对答尚切题，言语含糊，不配合，双眼视力光感，吞咽困难，饮水呛咳. 心、肺、肝、脾未见异常. 脑电图中度异常，体感诱发电位异常. 颅脑MRI示枕顶部蝶形长T1和长T2信号的病灶. 气相色谱查患者血浆24碳饱和脂肪酸（C24∶0）浓度：13.48 mg#12539;L-1, 22碳饱和脂肪酸（C22∶0）浓度：9.05 mg#12539;L-1，两个浓度比（C24∶0/C22∶0）等于1.49(正常范围0.939左右). 患者非近亲婚配所生，另有一妹妹，无家族史. 临床诊断：肾上腺脑白质营养不良（儿童脑型）. 　　1．2方法ALD基因的mRNA长3.7 kb，其中编码区为2238 bp. 本研究合成4对引物［2］，即：PIF和RT1, PⅡF和RT2, PⅢF和RT3, PⅣF和RT4，分4段（自5′端依次为ALD1, ALD2, ALD3, ALD4）对