槲皮素对非酒精性脂肪肝细胞ATP结合框转运子A1 mRNA表达影响.docVIP

槲皮素对非酒精性脂肪肝细胞ATP结合框转运子A1 mRNA表达影响 　【摘要】 目的： 探讨植物化学物质槲皮素(quercetin)对非酒精性脂肪肝(nonalcoholic fatty liver，NAFL)细胞三磷腺苷结合框转运子A1(ABCA1)表达的影响。方法： 建立人肝L02细胞脂肪变性模型，以不同浓度的槲皮素处理细胞后，用RTPCR检测ABCA1 mRNA的表达。结果： 槲皮素可以增加NAFL细胞ABCA1 mRNA的表达，且呈剂量依赖性。结论： 槲皮素能上调胆固醇转运中的重要蛋白ABCA1的表达。 【关键词】 槲皮素; 非酒精性脂肪肝; 人肝L02细胞; 三磷腺苷结合框转运子A1 　　[Abstract] Objective: To study the effects of quercetin on the expression of ATPbindingcassette transporter A1(ABCA1) mRNA in nonalcoholic fatty liver(NAFL) cells. Methods： HL02 cells were cultured in 50% fetal cattle blood serum for 24 h to induce NAFL model, adding quercetin in different doses to the culture medium.The level of ABCA1 mRNA was tested by semiquantitative RTPCR. Results： After treatment with quercetin，the expression of ABCA1 was increased at the same time. Conclusion： Quercetin had some inhibitory effects on NAFL cells and the effect on these cells was mainly related to the upregulation of ABCA1. 　　[Key words] quercetin; nonalcoholic fatty liver; HL02 cells; ATPbindingcassette transporter A1 　　非酒精性脂肪肝(nonalcoholic fatty liver，NAFL)病理学改变除三酰甘油(TG) 大量储积外,尚有胆固醇(TC)在肝细胞内的异常沉积。ABCA1 是ATP 结合框转运子(ATPbindingcassette transporter,ABC) 超家族的成员。研究表明,ABCA1 在胆固醇逆转运(RCT)、固醇代谢中起着极其重要的调节作用。近来从中草药和天然植物中提取的一些有效成分，已成为治疗该类疾病的热点和新途径。除公认的抗氧化剂普罗布考等西药外，植物提取成分——槲皮素(quercetin)也正获得越来越多的关注。我们前期的试验证明，槲皮素能降低脂肪变人肝L02细胞总胆固醇及胆固醇酯含量，增加游离胆固醇的外流，下调胆固醇合成的限速酶HMGCoA还原酶的表达[1]。本实验旨在进一步研究槲皮素对体外培养肝细胞胆固醇外流的作用及其相关机制，为治疗胆固醇代谢性疾病开辟新途径。 　　1 材料和方法 　　1 主要材料 　　人肝L02细胞株购自武汉大学中国典型培养物保藏中心。槲皮素、四甲基偶氮唑盐(MTT)、胎牛血清购于美国Sigma公司，RTPCR试剂盒为美国Promega公司产品。总RNA提取试剂盒(Trizol)为上海生物工程公司产品。其余试剂均为国产分析纯。ABCA1和GAPDH引物均由上海生物工程公司合成。 　　1.2 方 法 　　1.2.1 人肝L02细胞培养及NAFL模型的建立 人肝L02细胞培养接种于50 ml培养瓶中，将含体积分数10%的灭活胎牛血清、100 U/ml氨苄西林和100 μg/ml链霉素的RPMI1640完全培养基，置37℃、体积分数5% CO2、饱和湿度的孵箱内培养，每48 h换液1次，在细胞达1×109时用完全培养基重新悬浮，并以1∶3的比例传代，取对数生长期细胞进行实验。实验前用无血清的 RPMI1640培养24 h，使细胞周期同步化。参照范建高等[2]方法，在更换新鲜培养液后加入50%的胎牛血清，继续培养24 h，即形成非酒精性肝脂肪变性模型(镜像比较造模前后细胞内的脂滴变化，组织学上低倍镜下每单位面积见1/3以上的肝细胞脂肪变性和脂肪储积，无其他明显组织学改变)。加入槲皮素共同