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正交实验法优选复方降脂灵提取工艺 　 作者：陈红红， 郭姣， 唐春萍， 郭彤， 何伟 【摘要】 　　目的优选中药复方降脂灵的提取工艺。方法采用正交实验法，以出膏率和提取液中齐墩果酸的含量为指标进行优选。结果复方降脂灵的最佳提取工艺为加水12倍量，提取3次，2 h/次。结论对于出膏率，提取次数有显著性影响；对于齐墩果酸，提取次数、加水量和提取时间3个因素均无显著性影响。 【关键词】 复方降脂灵 正交实验 提取工艺 齐墩果酸 出膏率 复方降脂灵(原名丹七降脂汤)为广东药学院郭姣教授临床经验方，主要由女贞子、白术、杜仲等8味中药组成，临床上在降血脂、降血糖和改善血流变等方面均有良好的作用。其汤剂和粉末胶囊经临床、初步药效学研究，均证实疗效确切而无明显毒副作用［1］。女贞子是本复方中的君药，而齐墩果酸是女贞子的主要药效成分之一。齐墩果酸除了能用于治疗急性黄疸型肝炎、慢性迁延型与活动型肝炎和抗癌辅佐药物外，还具有降糖、降血脂、抗炎、抗病毒、抗衰老及增强免疫的作用［2］。通过水提取、90％乙醇提取、70％乙醇提取、半仿生提取和综合提取等不同提取工艺的药理学实验，结果表明以水提取法的药效为最好［3］。水提取法工艺简单、成本低，而且药效好。为了研究水提取工艺的最佳条件，用正交实验法，以出膏率和齐墩果酸含量为考察指标，对水提取工艺条件进行优选，为生产提供依据。 　　1 材料与仪器 　　1.1 材料女贞子、杜仲、大蓟、白术、田七等中药均购自广东省药材公司，经广东药学院生药学专家刘基柱老师鉴定为真品。 　　1.2 仪器与试剂T6紫外可见分光光度计（北京普析通用仪器有限公司）；HH-6电子恒温水浴锅（苏州威尔实验用品有限公司）；GZX-9420 MBE 电热恒温鼓风干燥箱（上海博迅实业有限公司医疗设备厂）。齐墩果酸对照品由中国药品生物制品检定所提供；香草醛（指示剂，天津市福晨化学试剂厂）；薄层层析硅胶H（层析用，青岛海洋化工厂）和羧甲基纤维素纳盐（CMC-Na）800－1200为化学纯；其它试剂均为分析纯。 齐墩果酸对照品使用液：精密称定齐墩果酸对照品10 mg，用三氯甲烷配制成浓度为0.2 mg/ml的溶液。 硅胶板的制备：称取硅胶H 5 g，放入研钵中，加入1％CMC-Na溶液适量，调成糊状，均匀涂布于洁净的玻璃板(20 cm×4 cm)上，使其表面均匀光滑。于室温下晾干后，置于烘箱内加热活化，在温度105℃左右保持活化30 min，然后放入干燥箱中保存，备用。 　　2 方法 　　2.1 工艺设计 　　采用加热回流的提取方法，提取时选择了加水量、提取时间及提取次数3个因素，每个因素选取三个水平设计了正交实验方案，实验因素水平见表1。根据以上因素水平,选择L9(3)4正交设计表，按照正交实验表项下的实验条件进行提取，用出膏率及齐墩果酸的含量作为考察指标，对水提工艺条件进行优选。 　　2.2 样品溶液的制备药材经60℃恒温烘30 min，稍加捣碎，称取处方药材共64 g。按正交实验表项下设计的实验条件以加热回流方式进行提取，合并水提取液。将上述提取液浓缩，定容至一定体积，制得样品溶液。表1 提取实验水平因素（略） 　 　　2.3 出膏率测定精密量取一定体积样品溶液，置于已干燥恒重的蒸发皿中，在水浴上蒸发至近干，再放置烘箱于105℃烘3～4 h，置干燥器中冷却至室温，精密称量质量，按下式计算出膏率。 　 　　出膏率（%）=WW×VV’×100% W′(g)为浸膏质量，W(g)为药材质量，V为样品溶液总体积，V′为量取样品溶液的体积。 　　　2.4 齐墩果酸的含量测定 　　2.4.1 标准曲线的制备采用高氯酸－香草醛比色法测定齐墩果酸的含量［4］。精密量取齐墩果酸对照品使用液（0.2 mg/ml的三氯甲烷溶液）0.1，0.2，0.3，0.4，0.5，0.6 ml（0.2，0.4，0.6，0.8，1.0，1.2 mg），分别置于刻度离心管中，水浴挥干溶剂，各精密加入5％香草醛乙酸溶液0.2 ml，高氯酸0.8 ml，混匀，置于70℃恒温水浴上加热15 min，冷却至室温，精密加入醋酸乙酯4 ml，摇匀。以试剂为空白，在555 nm处测定吸光度值，结果见表2。并以吸光度A对对照品使用液体积V进行直线回归，得回归方程A＝0.942 5V＋0.005 2，r=0.997 8。表2 标准曲线测定数据（略） 　 　　2.4.2 样品测定精密量取一定体积的样品溶液，浓缩成稠膏，干燥，称量质量。精密称取上述膏体10 g 于圆底烧瓶中，加入三氯甲烷30 ml，70℃恒温水浴回流1 h。用分液漏斗分出三氯甲烷层，于残渣中再加入三氯甲烷30 ml，同样回流提取1 h，合并三氯甲烷溶液，无水Na2SO4干燥，过滤，挥干溶剂，再用三氯甲烷定容至5.00 ml，备用。