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正交试验法探究牛膝中甾酮水煮提取工艺 　 作者：王龙，胥秀英，郑一敏，傅善权，易中宏 【关键词】 牛膝 　　摘要: 目的: 研究 牛膝中甾酮的水煮提取工艺与含量测定 方法 。 方法: 采用正交实验，筛选牛膝中甾酮的最佳水煮提取条件;用高效液相色谱法对提取物中蜕皮甾酮的含量进行测定。 结果: 牛膝中甾酮的最佳水煮提取条件为共加入50倍量水，在80～100℃下提取2次，2h/次;以蜕皮甾酮对照品色谱峰面积y对其含量x进行回归统计，线性回归方程为:y=1.02751×106 X+158195，r=0.9996，线性范围为0.406～7.308μg。 结论: 水煮提取工艺得到牛膝提取物中蜕皮甾酮的含量为9.30%;高效液相色谱法适合于牛膝提取物中蜕皮甾酮含量的测定。 　　关键词: 牛膝; 甾酮; 提取; 含量测定 　　Optimization of water extracting conditions of phytosterone from Achyranthes bidentata by orthogonal test 　　Abstract: Objective:To study the water extracting process and content determination of phytosterone from A.bidentata.Methods:Screened the optimum extraction condition with the orthogonal test and determined the content of ecdysterone with HPLC.Results: The best extraction condition was as follows:adding50times amount of water and boiling on80～100℃for2times in all，2h each time.The ecdysterone linear range was0.406～7.308μg，r=0.9996.Conclusion:The content of ecdysterone in the extract is9.30%.HPLC method is suitable for the determination of ecdysterone. 论文代写 　　Key words: A.bidentata; Phytosterone; Extraction; Content determination 　　牛膝为苋科植物牛膝Achyranthes bidentata BI.的干燥根，主产河南，具有补肝肾，强筋骨，活血通经的作用。甾酮是牛膝有效成分之一。牛膝中甾酮有蜕皮甾酮，牛膝甾酮，红苋甾酮等［1］ 。 文献 报道牛膝甾酮提取分离有乙醇回流 ［2～4］ 、甲醇回流［5］ 等方法，本文对牛膝中甾酮的水煮提取工艺和含量测定方法进行了研究，现报道如下。 　　1 材料与仪器 　　供试药材购于重庆桐君阁医药公司，经重庆市中药研究院傅善权副主任技师鉴定，为怀牛膝A.bidentata的干燥根;蜕皮甾酮对照品（由本实验室自制，纯度为99.2%，批号030516）;大孔吸附树脂（天津制胶厂）;甲醇为 分析 纯;水为重蒸水;其它试剂均为分析纯;日本岛津LC-10A型高效液相色谱仪。 　　2 方法与结果 　　2.1 正交实验设计 毕业论文 　　预试研究结果表明，采用水煮提取工艺，可取得较高的提取转移率，与用有机溶剂比较，具有成本低的特点。考虑到用水量、提取温度、提取次数和提取时间是水煮法提取牛膝中甾酮的重要 影响 因素，其中用水量对后续甾酮的分离提取过程影响较大，故作为重点考察因素，设置了6个水平，其它两个因素设置了2个水平。因此，选用L12 （6×22 ）不等水平正交试验表安排试验。表1 正交试验因素水平表（略） 　　称取牛膝药材适量，按上述正交实验条件进行处理，每组合重复3次。煮提液过滤后，滤液通过大孔吸附树脂柱，吸附完毕后，用85%乙醇溶液60ml洗脱，洗脱液于80℃烘干至恒重，得到牛膝提取物。 　　2.2 HPLC法测定蜕皮甾酮含量 论文代写 　　2.2.1 对照品溶液的制备 　　精密称取干燥至恒重的蜕皮甾酮对照品，用体积分数60%甲醇溶解制成0.406mg/ml溶液，作为对照品溶液。 　　2.2.2 样品溶液的制备 精密称取牛膝提取物适量，用60%甲醇制成5mg/ml的溶液，0.45μm滤膜滤过，滤液作为供试样品溶液。 　　　2.2.3 色谱条件 　　 参考 文献