tnf-α和il-13对人肺成纤维细胞胶原蛋白生成的影响.pdfVIP

中国细胞生物学学报 Chinese Journal of Cell Biology 2011, 33(6): 667–673 http ://www.cj TNF-α和IL-13对人肺成纤维细胞胶原蛋白生成的影响 1 2 3 2 2 2 2 3 4* 陈厚文　郭梦舟 　陈 琦 　吴 超 　李香龙 　范 杰 　熊志勇 　朱孟博 　石小玉 1 2 3 ( 南昌大学研究生院医学部, 南昌330006; 南昌大学第一临床医学院, 南昌330004; 南昌大学第二临床医学院, 南昌330004; 4南昌大学基础医学院, 南昌330006) 摘要 以胶原蛋白过量沉积为主要特征的纤维化是临床肺部疾患常见的病理现象。该研究 利用RT-PCR技术检测不同剂量TNF-α和IL-13对人肺成纤维细胞IL-13Rα1、IL-13Rα2和I型胶原 蛋白转录水平的影响; ELISA检测细胞培养上清sIL-13Rα2分泌量; 羟脯氨酸法定量分析各组肺成 纤维细胞胶原蛋白生成情况。结果发现: 在实验剂量条件下, TNF-α和IL-13对人肺成纤维细胞IL- 13Rα1的表达无显著影响; 两者均能不同程度地上调IL-13Rα2的表达; 与对照组相比, TNF-α对胶 原蛋白的表达有下调作用, IL-13则无显著影响。 关键词 TNF-α; IL-13; 肺成纤维细胞; 胶原蛋白 纤维化是包括间质性肺疾病、慢性阻塞性肺疾 自美国RD生物科学公司; 羟脯氨酸检测试剂盒(消 病和肺结核等在内的多种肺部疾患发生、发展过程 化法)购自南京建成科技有限公司; Bradford法蛋白定 中的一种重要病理改变。研究表明, 肺成纤维细胞 量试剂盒购自天根生化科技(北京)有限公司。 激活、增生, 继而产生大量胶原蛋白沉积于细胞外 1.2 方法 基质(ECM)是肺纤维化形成的关键环节。TNF-α和 1.2.1 细胞培养 人肺成纤维细胞HFL1培养于含 IL-13分别由Th 1和Th2生成, 是参与体内免疫调节的 10% FBS、100 U/ml青霉素和100 U/ml链霉素的F12K 主要细胞因子, 在纤维化、自身免疫性疾病和肿瘤 培养基中, 至细胞计数约107/ml或融合度约80%左右 的发生和发展中发挥着重要的作用。 时血清饥饿24 h 。对照组加入等体积PBS, 实验组分 本研究首先运用RT-PCR和ELISA技术对与肺 别加入不同剂量TNF-α和IL-13刺激24 h后收集上清 纤维化密切相关的IL-13Rα1和IL-13Rα2表达进行检 液和总RNA 。 测, 进而在转录和蛋白质两个水平上对肺成纤维细胞 1.2.2 IL-13Rα1、IL-13Rα2和I型胶原蛋白转录水平 胶原蛋白的分泌量变化进行分析, 探讨了IL-13Rα1、 检测 Trizol法裂解各组细胞(DNase I分解混入的 基因组DNA), 苯酚/氯仿抽提及无水乙醇沉淀法纯 IL-13Rα2的表达及胶原蛋白生成的调控机制, 比较了 D /D 比值(各样品测三次取平 化总RNA样本。以 260 280 人肺成纤维细胞对TNF-α和IL-13的不同反应性。 均值)计算RNA含量后, 将所有总RNA